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大鼠17-α甲睪酮(17-αMT)檢測試劑盒 的操作步驟
閱讀:159 發(fā)布時間:2018-12-20大鼠17-α甲睪酮(17-αMT)檢測試劑盒 操作步驟:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔,;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl,;另設(shè)一個空白對照孔,,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,,包被過夜,。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,,即甩去),,之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,,間歇搖動,。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次,。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),,孵育60min,。
(6)洗板,同(4),。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl,。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min,。
(9)洗板,,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,,輕輕混勻10s,,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng),。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準,。