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大鼠17-酮類固醇(17-KS)ELISA試劑盒操作步驟和樣本要求

閱讀:152          發(fā)布時間:2018-11-28
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大鼠17-酮類固醇(17-KS)ELISA試劑盒操作步驟】

1,、準備:從冰箱取出試劑盒,,室溫復溫平衡30分鐘。

2,、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。

3、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,,固定于框架上,,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,,記錄各孔位置,,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍),;空白對照孔不加。

4,、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

5、洗板:棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,靜置1min,,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板),。

6,、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加,。

7,、溫育:重復4的操作。

8,、洗板:重復5的操作,。

9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,,再加入顯色劑B液 50μL,,37℃避光顯色15min。

10,、終止:取出酶標板,,每孔加終止液50μL,,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。

11,、測定:以空白孔調零,,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值),。

12,、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,,再根據(jù)樣本的OD值,,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

大鼠17-酮類固醇(17-KS)ELISA試劑盒 樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),,因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑,。

2、標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,,可將標本放于-20℃保存,,但應避免反復凍融。

3,、樣本應充分離心,,不得有溶血及顆粒。

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