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大鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。

80pmol/L

5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

40pmol/L

4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20pmol/L

3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10pmol/L

2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5pmol/L

1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
大鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）酶聯(lián)免疫試劑盒用于測(cè)定大鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）含量,。檢測(cè)范圍：3pmol/L-80pmol/L。大鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）Elisa試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）水平,。用純化的大鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）,，再與HRP標(biāo)記的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）濃度。