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小鼠elisa試劑盒下面我們就來分析下常見的問題：
閱讀：136 發(fā)布時間：2018-9-20| 提 供 商 | 上海邦景實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 7.1KB |
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小鼠elisa試劑盒下面我們就來分析下常見的問題：
1,、試劑空白
試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標之一,。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質(zhì),；如利用Trinder反應(yīng)為原理的檢測試劑會因含酚類物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)榧t色,。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶,、淀粉酶等檢測試劑會因基質(zhì)分解出酚基苯胺而變黃,。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高,。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶,、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等負反應(yīng)，在放置過程中其試劑空白吸光度會因NADH自行氧化為NAD+而下降,。原則上,，吸光度上升的反應(yīng)，其試劑空白吸光度越低越好,，不能超過一個高限,；相反,，吸光度下降的反應(yīng)，其試劑空白吸光度不能低于一個低限,。因此,，試劑空白吸光度限值，常作為程序參數(shù)輸入儀器,，如經(jīng)核查超限,，儀器會自動報警，提示更換試劑,。需要指出的是,，還原型輔酶I(或II)等投料量不足或劣質(zhì)的原料，往往需要加大用量,，才使“表觀”吸光度上升,，湊合過試劑空白核對的“關(guān)”，其后果為如下情況：
1．1 線性范圍變窄現(xiàn)象：高值測不高,。原因：試劑時有效成分投料量不足,；試劑成份穩(wěn)定性較差。
1．2 靈敏度變低現(xiàn)象：酶促反應(yīng)速度曲線斜率下降,，測定結(jié)果有嚴重系統(tǒng)誤差,。原因：試劑底物濃度不足。
1．3 低值偏高 現(xiàn)象：試劑空白的變化曲線(吸光度VS時間)明顯波動,。原因：試劑自身不穩(wěn)定,，自行分解；工具酶純度不夠,，雜酶含量超限,，導(dǎo)致干擾作用。
2,、樣品信息
樣品的溶血,、脂血、黃疸等會對測定結(jié)果產(chǎn)生非化學(xué)反應(yīng)的干擾,。因此,，應(yīng)根據(jù)溶血、脂濁,、黃疸的光譜吸收特性,，采用雙波長或多波長的檢測模式，并在結(jié)果計算中扣除因溶血,、脂血,、黃疸引起的影響，減少干擾程度。
3,、測定范圍
每種待測物都有一個可測定的濃度或活性范圍,，樣品結(jié)果若超過此范圍，分析儀將顯示結(jié)果超過范圍的提示,。表示試劑已經(jīng)變質(zhì),，應(yīng)更換合格試劑。
4,、底物耗盡
使用連續(xù)監(jiān)測法,、兩點法測定酶活性時，若酶活性非常高,，底物接近被耗盡,，吸光度上升或下降會超過某一吸光度變化范圍，監(jiān)測期的吸光度將偏離線性,，使測定結(jié)果不可靠,。
5、酶的預(yù)活化
測定血清中的某些酶,，如CK，離體(采血)后很容易失活,。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基(一SH)被氧化造成的,。只有通過適當(dāng)?shù)倪€原作用才能重新激活。如CK—NAC試劑盒即含有CK活化劑,，名為N一乙酰半胱氨酸,。實驗研究證明，NAC對血清中已失活的CK活化過程約需180 S,。這就是CK測定為什么要延遲時間較長的理論依據(jù),。
6、校準與結(jié)果溯源性
酶的校正：要滿足在同一方法學(xué),、同一測定條件,、與理論計算的FACTOR值差異不大，沒有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素,，方可進行校正,。
檢驗結(jié)果溯源性，得建立一個可靠的參考系統(tǒng)作為準確性基礎(chǔ),，然后將準確性轉(zhuǎn)移到常規(guī)方法測定中去,，使常規(guī)方法測定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準確性基礎(chǔ)上來。在實現(xiàn)溯源性目標過程中,，永遠以患者新鮮標本為實驗對象,，以方法學(xué)對比試驗方法為驗證手段。
臨床化學(xué)中參考標準(二級標準)要有通用性，但提供的校準液并非通用的,，只適用于某一特定的分析系統(tǒng),。
校準液標示值往往是按其基質(zhì)偏差修正的，所以標示值并非實際值,。校準液,、質(zhì)控血清通常是經(jīng)過處理的混合人或動物血清，這種制備物在特定分析系統(tǒng)中往往與人新鮮血清反應(yīng)性不同而產(chǎn)生基質(zhì)偏差,。如總膽固醇測定基質(zhì)效應(yīng)研究指出：校準液酶法測定回收結(jié)果偏低可達5%~7%,。
7、試劑抗干擾作用的合理性有些液體雙試劑,，其實質(zhì)并不真正具備抗干擾的能力而只是解決了試劑的液體化和穩(wěn)定性問題,。Vc干擾必須同時具備二個條件：a)Vc攝入量較多；b)采血后立即測定,。實驗表明離體血清中Vc在90 min后會全部被氧化,。甘油三酯測定，有人主張選用雙試劑方法消除內(nèi)源性甘油,，這個方法是可行的,，但忽視了一個化學(xué)平衡理論。因為所有的酯在水溶液中都不是簡單地以酯的形式存在,，而是以水解與酯化相平衡的形式存在,。在一個平衡體系中，如果去除游離甘油,，這個平衡就向生成甘油方向移動,，甘油三酯就會重新水解，生成新的甘油,，達到新的平衡,，因此樣品與R1試劑孵育時間越長，測得甘油三酯值就越低,。甘油三酯測定,，不僅要去除游離甘油，而且還要克服樣本含量真實性發(fā)生的變化,，試劑中必須加入甘油激酶,，并且延遲時間要標準化。所以,，一些試驗項目在消除內(nèi)源性物質(zhì)干擾的同時,，會帶來樣品含量真實性的變化。