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TSZ elisa試劑盒原來是這樣操作的,！?
閱讀：117 發(fā)布時間：2018-9-12| 提 供 商 | 上海邦景實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 44.8KB |
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TSZ elisa試劑盒原來是這樣操作的,！
在酸性和高溫度條件下，可以與硫代巴比妥酸(TBA)反應(yīng)生成紅棕色的基惡唑-2,，4,。二酮)，其zui大吸收波長在532nm,。但是測定植物組織中MDA時受多種物質(zhì)的干擾,，其中zui主要的是可溶性糖，糖與TBA顯色反應(yīng)產(chǎn)物的zui大吸收波長在450nm,，但532nm處也有吸收,。植物遭受干旱、高溫,、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加,，因此測定植物組織中MDA—TBA反應(yīng)物質(zhì)含量時一定要排除可溶性糖的干擾。低濃度的鐵離子能夠顯著增加TBA與蔗糖或MDA顯色反應(yīng)物在532,、450nm處的消光度值,，所以在蔗糖、MDA與TBA顯色反應(yīng)中需一定量的鐵離子,，通常植物組織中鐵離子的含量為每克千重100—300ug·g-1,，根據(jù)植物樣品量和提取液的體積,，加入Fe3+的終濃度為0．5umol·L-1。
雙抗體夾心法
1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃ 過夜。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘,。（簡稱洗滌,，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃ 孵育1小時,。然后洗滌。（同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔）,。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃ 孵育0.5～1小時,，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘,。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”,、“-”號表示,。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。