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一、概念

1,、細(xì)胞系（Cell Line）：原代培養(yǎng)舞經(jīng)首ci傳代成功即成細(xì)胞系,，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系（Lineage of Cells）所組成。

2,、細(xì)胞株（Cell Strain）：通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱為細(xì)胞株,。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限,，稱為有限細(xì)胞株（finitecell strain）,；如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細(xì)胞株（continuous cell strain）,。對于人類腫瘤細(xì)胞,，在體外培養(yǎng)半年以上，生長穩(wěn)定,，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系,。

二、建立細(xì)胞系（或株）的要求

什么樣的體外培養(yǎng)群可被認(rèn)可為己鑒定的細(xì)胞,，視具體情況而定,，無統(tǒng)一規(guī)定。對于用作原代培養(yǎng)的細(xì)胞只要供體均一,，取材部位及組織種類等條件穩(wěn)定即可,，如用做長期培養(yǎng)，特別是反復(fù)傳代的細(xì)胞,，常需做如下說明：

1,、組織來源：細(xì)胞供體所屬物種，來自人體或者動物,；

個體性別,、年齡；取材的器官或組織。

如系腫瘤組織,，應(yīng)說明臨床和病理診斷,，以及病歷號等。

2,、細(xì)胞生物學(xué)檢測：

了解細(xì)胞一般和特殊的生物學(xué)性狀,，如細(xì)胞一般形態(tài)，特異結(jié)構(gòu),，細(xì)胞生長曲線和分裂指數(shù),，倍增時間，接種率等,。

如為腫瘤細(xì)胞,，為說明來源于原腫瘤組織并保持惡性，須做軟瓊脂培養(yǎng),，異體接種致瘤和對正常組織侵潤力等實驗,。

3、培養(yǎng)條件和方法,；應(yīng)說明細(xì)胞系（或株）適應(yīng)的生存環(huán)境,，即指明使用的培養(yǎng)基、血清種類,、用量以及適宜PH值,。

三、若干細(xì)胞建株的要點及基本過程

（一）腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)要點

1,、取材：材料主要來源于外科手術(shù)或活檢瘤組織,，取材時避免用壞死組織,，要挑選瘤細(xì)胞集中和活力較好的部位,，瘤性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng),，因故不能立即培養(yǎng)者,，可凍存。其培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織,。

2,、成纖維細(xì)胞排除：在腫瘤組織中常混雜有一些成纖維細(xì)胞,，培養(yǎng)時能與瘤細(xì)胞同時生長,，并常壓過癌細(xì)胞，導(dǎo)致癌細(xì)胞生長受阻以至消失,，應(yīng)仔細(xì)排除,。

排除方法常有：機(jī)械刮除法、反復(fù)貼壁法、消化排除法,、膠原酶消化法等,。

3、提高腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長率

根據(jù)實驗經(jīng)驗,，腫瘤細(xì)胞在體外不易培養(yǎng),，建立能傳代的腫瘤細(xì)胞系更為困難。一般當(dāng)腫瘤組成或細(xì)胞被原代培養(yǎng)后,，要經(jīng)過對新環(huán)境的適應(yīng)才能生長,，因此不能局限于一般培養(yǎng)法，須采用一些特殊措施,。如：用適宜底物,，鼠尾膠原底層及飼細(xì)胞底層等。用細(xì)胞生長因子,，根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促細(xì)胞生長因子,，如胰島素、氫化可的松,，雌激素等,。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。

（二）人類淋巴母細(xì)胞建株方法

l,、4ml肝素抗凝血于離心管中,，加入2ml RPMI 1640。

2,、混勻后沿管壁緩慢加到預(yù)置有4ml淋巴細(xì)胞分離液的液面上靜置30min,。

3、1500rpm,，15min,，吸取白細(xì)胞層（第二層）于另一離心管中。

4,、加RPMI 1640 5ml洗滌白細(xì)胞兩次,。

5、將白細(xì)胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中,，加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EBV（EB病毒）液,，混勻。

6,、水浴搖床,，40次/分，37℃,，3hr,。

7,、1500rpm，15min,。將細(xì)胞接種至1ml培養(yǎng)基中（內(nèi)含谷氨酰胺1mM／ml）加入10μl環(huán)胞霉素,，輕輕混勻，37℃培養(yǎng),。

8,、5天后觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)化和生長情況，決定是否半量換液,。一般半量換液l—2次,，并維持環(huán)胞霉素的濃度。

9,、待轉(zhuǎn)化細(xì)胞數(shù)量明顯上升,，并出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)塊后，可轉(zhuǎn)入25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,，加1—2ml培養(yǎng)基,，37℃培養(yǎng)10—15天，一般每隔3—4天觀察一次,，決定是否換液,，傳代。

10,、細(xì)胞生長達(dá)一定數(shù)量后凍存,，凍存前應(yīng)進(jìn)行核型分析和存檔。