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細胞系與細胞株的建立解讀
閱讀：80 發(fā)布時間：2025-2-25一,、概念
1、細胞系（Cell Line）：原代培養(yǎng)舞經(jīng)首ci傳代成功即成細胞系,，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系（Lineage of Cells）所組成。
2,、細胞株（Cell Strain）：通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物稱為細胞株,。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限,，稱為有限細胞株（finitecell strain）,；如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細胞株（continuous cell strain）,。對于人類腫瘤細胞,，在體外培養(yǎng)半年以上，生長穩(wěn)定,，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系,。
二、建立細胞系（或株）的要求
什么樣的體外培養(yǎng)群可被認可為己鑒定的細胞,，視具體情況而定,，無統(tǒng)一規(guī)定。對于用作原代培養(yǎng)的細胞只要供體均一,，取材部位及組織種類等條件穩(wěn)定即可,，如用做長期培養(yǎng)，特別是反復傳代的細胞,，常需做如下說明：
1,、組織來源：細胞供體所屬物種，來自人體或者動物,；
個體性別,、年齡；取材的器官或組織,。
如系腫瘤組織,，應(yīng)說明臨床和病理診斷，以及病歷號等,。
2,、細胞生物學檢測：
了解細胞一般和特殊的生物學性狀，如細胞一般形態(tài)，特異結(jié)構(gòu),，細胞生長曲線和分裂指數(shù),，倍增時間，接種率等,。
如為腫瘤細胞,，為說明來源于原腫瘤組織并保持惡性，須做軟瓊脂培養(yǎng),，異體接種致瘤和對正常組織侵潤力等實驗,。
3、培養(yǎng)條件和方法,；應(yīng)說明細胞系（或株）適應(yīng)的生存環(huán)境,，即指明使用的培養(yǎng)基、血清種類,、用量以及適宜PH值,。
三、若干細胞建株的要點及基本過程
（一）腫瘤細胞培養(yǎng)技術(shù)要點
1,、取材：材料主要來源于外科手術(shù)或活檢瘤組織,，取材時避免用壞死組織，要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位,，瘤性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料,。取材后盡快培養(yǎng)，因故不能立即培養(yǎng)者,，可凍存,。其培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。
2,、成纖維細胞排除：在腫瘤組織中?；祀s有一些成纖維細胞，培養(yǎng)時能與瘤細胞同時生長,，并常壓過癌細胞,，導致癌細胞生長受阻以至消失，應(yīng)仔細排除,。
排除方法常有：機械刮除法,、反復貼壁法、消化排除法,、膠原酶消化法等,。
3、提高腫瘤細胞培養(yǎng)存活率和生長率
根據(jù)實驗經(jīng)驗,，腫瘤細胞在體外不易培養(yǎng),，建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難,。一般當腫瘤組成或細胞被原代培養(yǎng)后，要經(jīng)過對新環(huán)境的適應(yīng)才能生長,，因此不能局限于一般培養(yǎng)法,，須采用一些特殊措施。如：用適宜底物,，鼠尾膠原底層及飼細胞底層等,。用細胞生長因子，根據(jù)細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子,，如胰島素,、氫化可的松，雌激素等,。也可以考慮動物媒介培養(yǎng),。
（二）人類淋巴母細胞建株方法
l、4ml肝素抗凝血于離心管中,，加入2ml RPMI 1640。
2,、混勻后沿管壁緩慢加到預置有4ml淋巴細胞分離液的液面上靜置30min,。
3、1500rpm,，15min,，吸取白細胞層（第二層）于另一離心管中。
4,、加RPMI 1640 5ml洗滌白細胞兩次,。
5、將白細胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中,，加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EBV（EB病毒）液,，混勻。
6,、水浴搖床,，40次/分，37℃,，3hr,。
7、1500rpm,，15min,。將細胞接種至1ml培養(yǎng)基中（內(nèi)含谷氨酰胺1mM／ml）加入10μl環(huán)胞霉素，輕輕混勻,，37℃培養(yǎng),。
8,、5天后觀察細胞轉(zhuǎn)化和生長情況，決定是否半量換液,。一般半量換液l—2次,，并維持環(huán)胞霉素的濃度。
9,、待轉(zhuǎn)化細胞數(shù)量明顯上升,，并出現(xiàn)細胞團塊后，可轉(zhuǎn)入25ml細胞培養(yǎng)瓶中,，加1—2ml培養(yǎng)基,，37℃培養(yǎng)10—15天，一般每隔3—4天觀察一次,，決定是否換液,，傳代。
10,、細胞生長達一定數(shù)量后凍存,，凍存前應(yīng)進行核型分析和存檔。