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抗體的結(jié)構(gòu):

      抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig),。Ig分五類,，即IgG、IgA,、IgM,、IgD和IgE。與免疫測(cè)定有關(guān)的Ig主要為 IgG和IgM,。Ig由兩個(gè)輕鏈（L）和兩個(gè)重鏈（H）的單體組成,。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤模笑剩╧appa）和λ（Lambda）兩種型別,。五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同,，這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ（gamma）鏈和μ（mu ）鏈,。

重鏈和輕鏈的N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異,，稱為可變區(qū),，分別用VH和VL表示。兩者構(gòu)成抗體的抗原結(jié)合部位,，只與相應(yīng)的抗原決定簇匹配,，發(fā)生特異性結(jié)合，是抗體專一性結(jié)合抗原的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ),。

IgG可被木瓜蛋白酶分解為三個(gè)區(qū)段,，其中兩個(gè)相同的區(qū)段稱抗原結(jié)合片段（Fab）。每個(gè)Fab都保存結(jié)合抗原的能力,，但只有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn),，是單價(jià)的，與抗原結(jié)合后不出現(xiàn)凝集或沉淀,。另一區(qū)段稱Fc段,，無(wú)抗體活性，但具有IgG有的抗原性,。

IgG可被胃蛋白酶分解為兩個(gè)片段,，一個(gè)Fab雙體，稱F（ab'）2,，能和兩個(gè)相同的抗原結(jié)合,；另一片段類似Fc，隨后被分解成小分子多肽,，無(wú)生物活性,。

IgM是由五個(gè)單體組成的五聚體，含 10個(gè)重鏈和10個(gè)輕鏈,，具有10個(gè)抗原結(jié)合價(jià),，由于空間位置的影響，只表現(xiàn)為五個(gè)抗原結(jié)合價(jià),。IgM分子量約為900000,，IgG分子量約為150000,。

機(jī)體被微生物感染后,，先產(chǎn)生IgM抗體，然后產(chǎn)生IgG抗體,。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間,，IgM抗體量逐漸減少而消失，而IgG抗體可長(zhǎng)期存在,，在疾病愈后可持續(xù)數(shù)年之久,。

IgM抗體一般為保護(hù)性抗體具有免疫性。因此IgM抗體的測(cè)定,，對(duì)某些傳染病如甲型肝炎有較高的臨床診斷價(jià)值,。

抗原抗體反應(yīng):

1.     可逆性

抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過(guò)程是一種動(dòng)態(tài)平衡,，其反應(yīng)式為：

Ag+Ab→Ag·Ab

抗體的親和力（affinity）是抗原抗體間的固有結(jié)合力，可以用平衡常數(shù)K表示：

K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]

Ag·Ab的解離程度與K值有關(guān),。高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合,，兩者結(jié)合牢固，不易解離,。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性,，因此可用親和層析法來(lái)提純抗原或抗體。在抗血清中,，特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分,。用親和層析法提取的特異性抗體，稱為親和層析純抗體,，應(yīng)用于免疫測(cè)定中可得到更好的效果,。

2.     最適比例

在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體復(fù)合物（沉淀）的量可繪制成一個(gè)曲線。曲線的高峰部分是抗原抗體比例最合適的范圍,，稱為等價(jià)帶（zone of equivalence）,。在等價(jià)帶前后分別為抗體過(guò)剩帶和抗原過(guò)剩帶。如果抗原或抗體極度過(guò)剩,，則無(wú)沉淀物形成,，在免疫測(cè)定中稱為帶現(xiàn)象（zone phenomenon）?？贵w過(guò)量稱為前帶（prezone）,，抗原過(guò)量稱為后帶（postzone）。在用免疫學(xué)方法測(cè)定抗原時(shí),，應(yīng)使反應(yīng)系統(tǒng)中有足夠的抗體量,，否則測(cè)得的量會(huì)小于實(shí)際含量，甚至出現(xiàn)假陰性,。

3.     特異性

抗原抗體的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間,。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性,。例如乙肝病毒中的表面抗原（ HBsAg）,、e抗原（HBeAg）和核心抗原（HBcAg），隨來(lái)源于同一病毒,，但僅與其相應(yīng)的抗體結(jié)合,，而不與另外兩種抗體反應(yīng)?？乖贵w反應(yīng)的這種特異性使免疫測(cè)定能在一非常復(fù)雜的蛋白質(zhì)化合物（例如血清）中測(cè)定某一特定的物質(zhì),，而不需先分離待檢物。

但是這種特異性也不是絕對(duì)的,。假使兩種化合物有著部分相同的結(jié)構(gòu),，在抗原抗體反應(yīng)中可出現(xiàn)交叉反應(yīng),。例如：絨毛膜促性腺激素（hCG）和黃體生成激素（LH）均由α和β兩個(gè)亞單位組成，其結(jié)構(gòu)的不同處在β亞單位,，而兩者的α亞單位是同類的,。用hCG免疫動(dòng)物所得的抗血清中含有抗α-hCG和抗β-hCG兩種抗體，抗α-hCG抗體將與LH中的α酶位發(fā)生交叉反應(yīng),。在臨床檢驗(yàn)中,，如用抗hCG抗血清作為妊娠診斷試劑檢定尿液中hCG，只能用于hCG濃度較高的試驗(yàn),，否則婦女生理性排泄入尿液中的微量LH將與之發(fā)生交叉反應(yīng),。因此在作為早孕診斷（敏感度應(yīng)達(dá)到50 mIu/ml hCG）的實(shí)驗(yàn)中必須應(yīng)用只對(duì)hCG特異的抗β-hCG，以避免與其它激素的交叉反應(yīng)的發(fā)生,。

4.     敏感性

在測(cè)定血清中某一物質(zhì)的含量時(shí),，化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平，酶反應(yīng)測(cè)定法的敏感度約為5~10 μg/ml,，免疫測(cè)定中凝膠擴(kuò)散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿,。標(biāo)記的免疫測(cè)定的敏感度可提高數(shù)千倍，達(dá)ng/ml水平,。例如,，用放射免疫測(cè)定法或酶免疫測(cè)定法測(cè)定HBsAg，其敏感度可達(dá)0.1 ng /ml,。

免疫測(cè)定在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用：

由于各種抗原成份,，包括小分子的半抗原，均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體,，利用此抗體作為試劑就可檢測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原,，因此免疫測(cè)定的應(yīng)用范圍極廣，在臨床檢驗(yàn)中可用于測(cè)定：

1)  體液中的各種蛋白質(zhì),，包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等,。

2)  激素，包括小分子量的甾體激素等,。

3)  抗生素和藥物,。

4)  病原體抗原，HBsAg,、HBeAg等,。

5)  另外,，也可利用純化的抗原檢測(cè)標(biāo)本中的抗體,，例如抗-HBs等。

5.     標(biāo)記的免疫測(cè)定

如上所述,，免疫測(cè)定是一種很敏感的測(cè)定方法,，抗原抗體反應(yīng)后直接測(cè)定形成的沉淀或濁度,，敏感度可達(dá)5~10 μg/ml，但在臨床檢驗(yàn)中,，某些待測(cè)物在標(biāo)本中的含量遠(yuǎn)低于這一水平,，因此要尋找增加敏感度的方法。標(biāo)記的免疫測(cè)定是將檢測(cè)試劑中的抗原或抗體用可微量測(cè)定的物質(zhì)加以標(biāo)記,，通過(guò)測(cè)定標(biāo)記物來(lái)提高敏感度,。在放射免疫測(cè)定和酶免疫測(cè)定中，標(biāo)記物分別為放射性核素和酶,，最后用測(cè)定放射性和酶活力來(lái)計(jì)算待檢物的量,，敏感度可比直接測(cè)定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。在標(biāo)記免疫測(cè)定中,，一般加入過(guò)量的標(biāo)記試劑以保證與待測(cè)物反應(yīng),。以標(biāo)記抗體（Ab ※）檢測(cè)抗原（Ag）為例，反應(yīng)式如下：

Ag+ Ab※ →AgAb※+Ab※

在反應(yīng)產(chǎn)物中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※ ,，如不將兩者分離而測(cè)定標(biāo)記物,，測(cè)得的結(jié)果將為兩者之和。因此,，游離標(biāo)記物與結(jié)合標(biāo)記物的分離是標(biāo)記免疫測(cè)定中的重要步驟,。可采用多種手段,，固相載體是其中之一,。如將抗原或抗體包被在固相載體上，然后再與標(biāo)記的抗原或抗體直接反應(yīng),，結(jié)合的標(biāo)記物被固定在載體上,，而游離的標(biāo)記物留于溶液中。這樣可以通過(guò)洗滌將游離的Ab※除去,，結(jié)合標(biāo)記物的測(cè)定可在固相上進(jìn)行,。

6.    酶免疫測(cè)定

酶免疫測(cè)定（enzymeimmunoassay）可分為均相（homogenous）和非均相（heterogenous）兩種類型。在均相EIA中可不進(jìn)行游離的和結(jié)合的標(biāo)記物的分離而直接測(cè)定標(biāo)記物,。例如在某種條件下,，抗原抗體反應(yīng)后形成的酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物中的酶失去其對(duì)底物作用的活力，因而測(cè)出的酶活力直接反映游離的酶標(biāo)記物,。均相EIA在臨床檢驗(yàn)中較少應(yīng)用,。非均相EIA需先進(jìn)行游離的和結(jié)合的標(biāo)記物的分離。如前所述,，固相載體可用作一種分離手段,。這種固相酶免疫測(cè)定方法在1971年最初建立時(shí)稱為酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（enzymelinked immunosorbent assay），簡(jiǎn)稱ELISA，在國(guó)內(nèi)有譯作酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的,，雖然含義不全確切,，但已習(xí)用。