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      細(xì)胞遷移(Cell migration)：因其類似體外傷口愈合過(guò)程,，又名傷口愈合實(shí)驗(yàn)(Wound healing assay),，是指細(xì)胞在接收到遷移信號(hào)或感受到某些物質(zhì)的梯度后而產(chǎn)生的移動(dòng)。它是一種廣泛建立的研究體外集體細(xì)胞遷移的技術(shù),。,。細(xì)胞劃痕（Wound Healing)是一種操作簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法,。

      基本原理：在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域,，稱為“劃痕/傷口"，劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕/傷口"愈合,，于細(xì)胞遷移過(guò)程中在開(kāi)始和定期捕獲圖像,，通過(guò)測(cè)量不同時(shí)間點(diǎn)的劃痕間距并計(jì)算差值，可對(duì)細(xì)胞的遷移能力做出判斷,。

       條件好的實(shí)驗(yàn)室可以使用活細(xì)胞成像來(lái)分析創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)中角質(zhì)形成細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞的遷移活動(dòng),。結(jié)合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時(shí)間的速度,。使用延時(shí)顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點(diǎn)是,，可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析,。

   

       通常，用于傷口愈合試驗(yàn)的細(xì)胞類型旨在重建表皮的再生特征,。永生化的細(xì)胞系和原代細(xì)胞經(jīng)常被用作這方面的模型,。蕞常用的細(xì)胞類型是角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

1.學(xué)習(xí)：了解實(shí)驗(yàn)的目的,、實(shí)驗(yàn)所用試劑耗材,、實(shí)驗(yàn)基本操作和注意事項(xiàng)、結(jié)果分析等,。

2.耗材：六孔板,、馬克筆、直尺,、200ul槍頭,、PBS、wan全培養(yǎng)基等,。

3.規(guī)劃：根據(jù)所用細(xì)胞生長(zhǎng)速度和所需定點(diǎn)拍照時(shí)間提前規(guī)劃實(shí)驗(yàn),。建議在做實(shí)驗(yàn)之前進(jìn)行一次預(yù)實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)步驟：  

1.劃線：于六孔板底面,，馬克筆順直尺畫三條橫線作為標(biāo)記線,。

2.種板：根據(jù)分組種板，細(xì)胞密度為5x105個(gè)/孔左右,。并務(wù)必鋪勻,。

3.劃痕：待細(xì)胞長(zhǎng)滿后，用直尺比著,，200ul槍頭垂直于孔板和畫的標(biāo)記線劃兩條垂線,，使劃痕與標(biāo)記線相交，可以形成若干交叉點(diǎn),，作為固定的檢測(cè)點(diǎn),。

4.清洗：棄去舊培養(yǎng)基，用PBS輕輕潤(rùn)洗兩到三次,，直到劃下來(lái)的細(xì)胞沖洗干凈,。

5.加液：根據(jù)分組分別加入加藥培養(yǎng)基或無(wú)血清培養(yǎng)基。

6.拍照觀察：劃痕,、清洗,、加液完成后，用顯微鏡拍不同倍數(shù)的照片,，作為0h對(duì)照,。放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。在所需時(shí)間點(diǎn)取出細(xì)胞,，于顯微鏡下觀察同一位置劃痕寬度并拍照。

7.數(shù)據(jù)分析：一種是統(tǒng)計(jì)細(xì)胞遷移的距離,，一種是統(tǒng)計(jì)劃痕面積,。都可以用ImageJ軟件來(lái)進(jìn)行分析。

那么制作劃痕實(shí)驗(yàn)需要注意事項(xiàng)：

1. 細(xì)胞的密度,；劃痕實(shí)驗(yàn)一般是幾種細(xì)胞的結(jié)合,，但是每種細(xì)胞的生長(zhǎng)速度會(huì)不一樣，所以需要按照細(xì)胞的生長(zhǎng)特性調(diào)整培養(yǎng)時(shí)間,，細(xì)胞鋪滿孔底時(shí)劃痕的效果會(huì)比較好,，建議是100%的鋪滿。

2. 用槍頭畫線時(shí)盡量垂直,，以6孔板為例 ,，一個(gè)孔可以畫6條線

3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細(xì)胞

4. 注意培養(yǎng)方式一定要改成無(wú)血清或者低血清的培養(yǎng)基,，因?yàn)椋簞澓酆笥脽o(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,，意在說(shuō)明在監(jiān)測(cè)的 24 小時(shí)內(nèi)，劃痕的縮小是細(xì)胞 遷移作用的結(jié)果,，所以要將細(xì)胞增殖造成細(xì)胞遷移的影響降到蕞低,；但若細(xì)胞改成無(wú)血清培養(yǎng)后大面積漂浮，需要適量加入血清濃度不能高于2%,。

5. （5）放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱,，培養(yǎng)?？砂?,，10，12,，15時(shí)間點(diǎn)取樣,，拍照(具體時(shí)間依實(shí)驗(yàn)需要而定)。

6. （6）統(tǒng)計(jì)方法：使用Image J軟件打開(kāi)圖片后,，抓取自己畫的線條,，計(jì)算細(xì)胞間距離的平均值。