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      細胞遷移(Cell migration)：因其類似體外傷口愈合過程，又名傷口愈合實驗(Wound healing assay)，是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質的梯度后而產(chǎn)生的移動,。它是一種廣泛建立的研究體外集體細胞遷移的技術,。,。細胞劃痕（Wound Healing)是一種操作簡單,，經(jīng)濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。

      基本原理：在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域,，稱為“劃痕/傷口",，劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕/傷口"愈合，于細胞遷移過程中在開始和定期捕獲圖像,，通過測量不同時間點的劃痕間距并計算差值,，可對細胞的遷移能力做出判斷。

       條件好的實驗室可以使用活細胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實驗中角質形成細胞或者成纖維細胞的遷移活動,。結合包含的軟件分析算法,，有可能延遲量化間隙表面關閉和關閉推移時間的速度。使用延時顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點是,，可以在恒溫箱內確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析,。

   

       通常，用于傷口愈合試驗的細胞類型旨在重建表皮的再生特征,。永生化的細胞系和原代細胞經(jīng)常被用作這方面的模型,。蕞常用的細胞類型是角質形成細胞和成纖維細胞。

實驗前準備：

1.學習：了解實驗的目的,、實驗所用試劑耗材,、實驗基本操作和注意事項、結果分析等,。

2.耗材：六孔板,、馬克筆、直尺,、200ul槍頭,、PBS、wan全培養(yǎng)基等,。

3.規(guī)劃：根據(jù)所用細胞生長速度和所需定點拍照時間提前規(guī)劃實驗。建議在做實驗之前進行一次預實驗,。

實驗步驟：  

1.劃線：于六孔板底面,，馬克筆順直尺畫三條橫線作為標記線。

2.種板：根據(jù)分組種板,，細胞密度為5x105個/孔左右,。并務必鋪勻。

3.劃痕：待細胞長滿后,，用直尺比著,，200ul槍頭垂直于孔板和畫的標記線劃兩條垂線，使劃痕與標記線相交，可以形成若干交叉點,，作為固定的檢測點,。

4.清洗：棄去舊培養(yǎng)基，用PBS輕輕潤洗兩到三次,，直到劃下來的細胞沖洗干凈,。

5.加液：根據(jù)分組分別加入加藥培養(yǎng)基或無血清培養(yǎng)基。

6.拍照觀察：劃痕,、清洗,、加液完成后，用顯微鏡拍不同倍數(shù)的照片,，作為0h對照,。放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。在所需時間點取出細胞,，于顯微鏡下觀察同一位置劃痕寬度并拍照。

7.數(shù)據(jù)分析：一種是統(tǒng)計細胞遷移的距離,，一種是統(tǒng)計劃痕面積,。都可以用ImageJ軟件來進行分析。

那么制作劃痕實驗需要注意事項：

1. 細胞的密度,；劃痕實驗一般是幾種細胞的結合,，但是每種細胞的生長速度會不一樣，所以需要按照細胞的生長特性調整培養(yǎng)時間,，細胞鋪滿孔底時劃痕的效果會比較好,，建議是100%的鋪滿。

2. 用槍頭畫線時盡量垂直,，以6孔板為例 ,，一個孔可以畫6條線

3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細胞

4. 注意培養(yǎng)方式一定要改成無血清或者低血清的培養(yǎng)基,，因為：劃痕后用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞,，意在說明在監(jiān)測的 24 小時內，劃痕的縮小是細胞 遷移作用的結果,，所以要將細胞增殖造成細胞遷移的影響降到蕞低,；但若細胞改成無血清培養(yǎng)后大面積漂浮，需要適量加入血清濃度不能高于2%,。

5. （5）放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱,，培養(yǎng)?？砂?,，10,，12，15時間點取樣,，拍照(具體時間依實驗需要而定),。

6. （6）統(tǒng)計方法：使用Image J軟件打開圖片后，抓取自己畫的線條,，計算細胞間距離的平均值,。