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原代細(xì)胞培養(yǎng)基本流程
閱讀:176 發(fā)布時(shí)間:2024-5-27 原代細(xì)胞可用來轉(zhuǎn)染siRNA,、antisense RNA,、microRNA 等 200bp 以內(nèi)的小分子 RNA 和 DNA,,可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞,。目前,無論國外還是國內(nèi),,原代細(xì)胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個(gè)熱點(diǎn)難題,,市場(chǎng)還缺乏真正有效的商品化的原代細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑。原代細(xì)胞能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞,,獲得比較理想的基因敲除效果,。甚至對(duì)一些活體寄生蟲幼蟲,,也能獲得較為理想的轉(zhuǎn)染結(jié)果。對(duì)于大多數(shù)原代細(xì)胞,,RFect PM 細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽性率都在 80%以上,,而轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到 10%。
原代細(xì)胞培養(yǎng)基本流程:
1,、器官和組織的選擇
盡可能的去除不必要的組織和血跡,。
2、原代細(xì)胞的分離
(1)應(yīng)用PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒I,、II,、III。
(2)根據(jù)組織來源不同,,可選用不同的PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒,。
3、原代細(xì)胞的培養(yǎng):
(1)PriCells原代細(xì)胞特制培養(yǎng)基
(2)PriCells原代細(xì)胞特制添加物
(3)優(yōu)質(zhì)胎牛血清
4,、細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定:
PriCells原代細(xì)胞鑒定試劑盒
4,、原代細(xì)胞的傳代、保存
(1)傳代:依椐細(xì)胞的生長狀態(tài),,生長的細(xì)胞1:2或1:3進(jìn)行傳代,。
(2)保存:DMSO+培養(yǎng)液+血清
按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃過夜)→液氮。
5,、原代細(xì)胞的復(fù)蘇
(1)取出細(xì)胞,,迅速放入37℃溫水中快速解凍。
(2)吸出細(xì)胞懸液,,并加10倍以上培養(yǎng)液,。
(3)用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后接種培養(yǎng)瓶,放入37℃CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),。