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技術文章

原代細胞培養(yǎng)基本流程

閱讀:143          發(fā)布時間:2024-5-27

       原代細胞可用來轉(zhuǎn)染siRNA,、antisense RNA,、microRNA 等 200bp 以內(nèi)的小分子 RNA 和 DNA,可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細胞,。目前,,無論國外還是國內(nèi),原代細胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個熱點難題,,市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞核酸轉(zhuǎn)染試劑,。原代細胞能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細胞,獲得比較理想的基因敲除效果,。甚至對一些活體寄生蟲幼蟲,,也能獲得較為理想的轉(zhuǎn)染結(jié)果。對于大多數(shù)原代細胞,,RFect PM 細胞轉(zhuǎn)染陽性率都在 80%以上,,而轉(zhuǎn)染細胞死亡率不到 10%。

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原代細胞培養(yǎng)基本流程:

1,、器官和組織的選擇

盡可能的去除不必要的組織和血跡,。


2、原代細胞的分離

(1)應用PriCells原代細胞分離試劑盒I,、II,、III。

(2)根據(jù)組織來源不同,,可選用不同的PriCells原代細胞分離試劑盒,。


3、原代細胞的培養(yǎng):

(1)PriCells原代細胞特制培養(yǎng)基

(2)PriCells原代細胞特制添加物

(3)優(yōu)質(zhì)胎牛血清


4,、細胞的培養(yǎng)和鑒定:

PriCells原代細胞鑒定試劑盒


4,、原代細胞的傳代、保存

(1)傳代:依椐細胞的生長狀態(tài),,生長的細胞1:2或1:3進行傳代,。

(2)保存:DMSO+培養(yǎng)液+血清

按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃過夜)→液氮。


5,、原代細胞的復蘇

(1)取出細胞,,迅速放入37℃溫水中快速解凍。

(2)吸出細胞懸液,并加10倍以上培養(yǎng)液,。

(3)用培養(yǎng)液適當稀釋后接種培養(yǎng)瓶,,放入37℃CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。



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