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微生物分離純化多種方法分述
閱讀：198 發(fā)布時間：2024-4-28 含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物（mixed culture）,。如果在一個菌落中所有細(xì)胞均來自于一個親代細(xì)胞，那么這個菌落稱為純培養(yǎng)（pureculture）,。在進(jìn)行菌種鑒定時,，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化,，方法有許多種,。
１,、傾注平板法
首先把微生物懸液通過一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合,，然后把這混合液傾注到無菌的培養(yǎng)皿中,，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng),。單一細(xì)胞經(jīng)過多次增殖后形成一個菌落,，取單個菌落制成懸液，重復(fù)上述步驟數(shù)次,，便可得到純培養(yǎng)物,。
２,、涂布平板法
首先把微生物懸液通過適當(dāng)?shù)南♂?，取一定量的稀釋液放在無菌的已經(jīng)凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上,，經(jīng)恒溫培養(yǎng)便可以得到單個菌落,。
３,、平板劃線法
簡單的分離微生物的方法是平板劃線法,。用無菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進(jìn)行劃線。劃線的方法很多，常見的比較容易出現(xiàn)單個菌落的劃線方法有斜線法,、曲線法,、方格法、放射法,、四格法等,。當(dāng)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動時，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋,，最后在所劃的線上分散著單個細(xì)胞,，經(jīng)培養(yǎng)，每一個細(xì)胞長成一個菌落,。
?。础⒏患囵B(yǎng)法
富集培養(yǎng)法的方法和原理非常簡單,。我們可以創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長,，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進(jìn)行競爭,，在生長能力方面遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其他微生物,。如果要分離一些專性寄生菌，就必須把樣品接種到相應(yīng)敏感宿主細(xì)胞群體中,，使其大量生長,。通過多次重復(fù)移種便可以得到純的寄生菌。
?。?、厭氧法
在實驗室中，為了分離某些厭氧菌,，可以利用裝有原培養(yǎng)基的試管作為培養(yǎng)容器,，把這支試管放在沸水浴中加熱數(shù)分鐘，以便逐出培養(yǎng)基中的溶解氧,。然后快速冷卻,，并進(jìn)行接種。接種后,，加入無菌的石蠟于培養(yǎng)基表面,，使培養(yǎng)基與空氣隔絕。另一種方法是,，在接種后,，利用N2或CO2取代培養(yǎng)基中的氣體，然后在火焰上把試管口密封,。有時為了更有效地分離某些厭氧菌,，可以把所分離的樣品接種于培養(yǎng)基上,，然后再把培養(yǎng)皿放在全密封的厭氧培養(yǎng)裝置中。
6,、單細(xì)胞（或單孢子）分離法
是采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細(xì)胞或單個個體進(jìn)行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng),。較大的微生物，可采用毛細(xì)管提取單個個體,。個體相對較小的微生物,，需采用顯微操作儀，在顯微鏡下用毛細(xì)管或顯微針,、鉤,、環(huán)等挑取單個微生物細(xì)胞或孢子以獲得純培養(yǎng)。單細(xì)胞分離法對操作技術(shù)有比較高的要求,。