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ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)常見問題解答
閱讀：389 發(fā)布時(shí)間：2024-2-19ELISA是一種廣泛應(yīng)用在測(cè)定液體樣本中的蛋白,、抗體、或激素的免疫分析技術(shù),。
1. 產(chǎn)品有哪幾種規(guī)格,？可檢測(cè)多少個(gè)樣本？
產(chǎn)品規(guī)格為96T,。
每次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線一般設(shè)7個(gè)不同濃度,，加上空白孔，標(biāo)準(zhǔn)曲線一共需要8個(gè)孔,。因此,，一個(gè)96T試劑盒最多可以測(cè)定88個(gè)樣本（不做重復(fù)且一次用完）,。板條可拆卸，可滿足您少量多次實(shí)驗(yàn)需求,。
2. 產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何,？
產(chǎn)品在研發(fā)前期已通過嚴(yán)格的穩(wěn)定測(cè)試，發(fā)貨前亦須通過檢測(cè)并提供質(zhì)檢報(bào)告,，在市場(chǎng)上深受廣大客戶的贊許,！
3.一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要多長(zhǎng)時(shí)間？
雙抗體夾心ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要3.5-4小時(shí),，競(jìng)爭(zhēng)ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要2-2.5小時(shí),。
4.血清樣本如何處理？
全血標(biāo)本于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
5. 血漿樣本如何處理,？
建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后,，于1000×g離心15分鐘，仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
6.細(xì)胞上清液樣本如何處理,？
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無菌管收集。離心20分鐘左右（1000×g）,。仔細(xì)收集上清,。
7.細(xì)胞裂解液樣本如何處理？
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或者超聲破碎,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心10分鐘左右（5000×g）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
8.組織樣本如何處理,？
用預(yù)冷的PSB (0.01M,pH=7.4)沖洗組織,，以去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果）,，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比,，比如1g的組織樣本對(duì)應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘,，取上清檢測(cè),。
9.為什么有的試劑盒是采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法？
小分子抗原或半抗原因?yàn)槿狈勺鲓A心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn),，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定,，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法。其原理是標(biāo)本中的抗原和固相載體上的抗原競(jìng)爭(zhēng)生物素化抗體上的結(jié)合位點(diǎn),，標(biāo)本中抗原量含量愈多,，結(jié)合在固相上的生物素化抗體愈少，最后的顯色也愈淺,，即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比,。小分子激素等ELISA測(cè)定多用此法。
10.用什么軟件處理ELISA檢測(cè)的數(shù)據(jù)比較好,？
ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合可以應(yīng)用Curve Expert軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,。它使用非常方便，可以生成漂亮的曲線應(yīng)用到論文之中,。軟件可以在下載中心進(jìn)行下載,。
11. 試劑盒做的結(jié)果不理想怎么辦？
實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想請(qǐng)及時(shí)與客服或技術(shù)支持聯(lián)系,，我們可以幫您一起分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。如果僅憑實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)無法判斷，您可以將試劑盒發(fā)回給我們進(jìn)行售后檢測(cè),。如果是試劑盒本身的質(zhì)量問題,，可以為您退換貨；如果是實(shí)驗(yàn)操作的問題,，技術(shù)人員可以給您一些改進(jìn)的建議,。
12.使用Elabscience ELISA Kit發(fā)表論文有獎(jiǎng)勵(lì)嗎？
如果您使用我公司的ELISA Kit且已發(fā)表論文,，可以獲得300～1000元獎(jiǎng)學(xué)金或代金券,，具體獎(jiǎng)勵(lì)政策請(qǐng)咨詢銷售人員,。
13.怎樣處理elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)果？
1.ELISA實(shí)驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔,，然后計(jì)算每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值,，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于10%。
2.平均OD值減去空白孔的OD值(競(jìng)爭(zhēng)法不需要減空白孔的OD值),。
3.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
以減去本底后的OD值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸,，利用作圖軟件得出一個(gè)合適的計(jì)算方法,。建議使用合適的軟件來作圖，比如CurveExpert 1.4,。這款軟件能夠給出很多種方法（比如直線,、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù),、四參數(shù)方程等）并從中選擇一條最合適的方程,。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合，可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù),，將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程,，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，得到的結(jié)果應(yīng)該與實(shí)際濃度很接近（+/-10%）,。選擇擬合度最高的那條曲線,。