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    穩(wěn)定細胞株是一種常用于基因表達,、藥物篩選和蛋白質表達等領域的工具,。但是,，穩(wěn)定細胞株的篩選需要經過一系列的步驟和實驗，下面介紹一下穩(wěn)定細胞株篩選的兩種方法和穩(wěn)定細胞株的篩選簡要步驟：

一、質粒轉染法
先把質粒整合到染色體上后,，用相應的質粒DNA中的抗性標志來篩選該細胞系,，單克隆篩選穩(wěn)定細胞株。
1,、篩選濃度測定,，以10~14 天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度；
2,、進行細胞接種,，轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定,。進行轉染當天細胞密度應達到60%~80% 覆蓋,；
3、進行細胞轉染
4,、利用質粒上含有的抗性選擇進行篩選,，并鑒定篩選結果。

二,、慢病毒轉染法：
應用逆轉錄病毒,，慢病毒轉染，篩選穩(wěn)定細胞株,。慢病毒可以攜帶外源基因隨機整合進基因組,。轉染得到穩(wěn)定細胞株的效率高，是建立穩(wěn)定株的比較不錯的方式,。
1,、將人源化的抗體基因轉接到慢病毒載體上，
2,、使用包裝細胞,，一般為293細胞，包裝出病毒,，不同類型病毒包裝時間一般在3-5天,。
3、用病毒轉染目的細胞,。包裝好的病毒要先測滴度,，根據滴度決定轉染目的細胞的病毒量。
4,、后期篩選,。轉染目的細胞1-2天后加抗生素篩選得到穩(wěn)定細胞株。

穩(wěn)定細胞株篩選步驟：
1.構建攜帶目標基因的載體
首先,，需要將目標基因克隆到攜帶有選擇標記的載體中,，例如含有抗生素抗性基因的質粒,。然后將該載體轉染到目標細胞中。

2.選擇標記篩選
轉染后的細胞需要在含有抗生素的培養(yǎng)基中進行篩選,。只有成功轉染的細胞才能夠在含有抗生素的培養(yǎng)基中生長,。

3.穩(wěn)定細胞株的篩選
在完成了選擇標記篩選后，需要對細胞進行進一步的篩選,，以得到穩(wěn)定的細胞株,。這可以通過對細胞進行單克隆分離來實現。具體地,，將轉染后的細胞在96孔板中進行單克隆分離,，每個孔只保留一個細胞。然后,，通過檢測細胞株的表達水平和穩(wěn)定性,，篩選出較佳的穩(wěn)定細胞株。

總結：
穩(wěn)定細胞株的篩選是一個復雜的過程,，需要仔細設計和實驗,。通過上述步驟，可以篩選出高表達,、穩(wěn)定的細胞株,，為后續(xù)的實驗和研究提供了有力的支持。

細胞穩(wěn)轉株構建病毒法：

1,、確定目標細胞系的相關信息,，細胞的培養(yǎng)條件，細胞的增值速度,，支原體污染情況,；

2、預實驗確定MOI值,，可通過查閱文獻確定慢病毒在目標細胞系中的MOI值也可參考查閱得到的數據，設計梯度實驗,，摸索最適MOI,；

3、預實驗確定篩選藥物用量,，常用的藥物篩選有：puro,、G418、潮霉素等,；

    4,、 細胞鋪板，將需要的細胞量接種于合適的培養(yǎng)皿中,；

    5,、 細胞感染,，通過接種的細胞量及預實驗得來的MOI來計算添加的病毒體積；

6,、撤病毒,，第二天，一般不超過24h換液,；

    7,、 轉染48h后選擇對應的抗性藥物進行篩選；

8,、篩選結束后進行單克隆化,，選擇陽性克隆進行培養(yǎng)。