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資訊推送：微生物培養(yǎng)基配制和滅菌
閱讀：212 發(fā)布時間：2023-8-21微生物培養(yǎng)基是供微生物生長,、繁殖,、代謝的混合養(yǎng)料。由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型,，對營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同,，加之研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多,，使用的原料也各有差異,，但從營養(yǎng)角度分析，微生物培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源,、氮源,、無機鹽、生長素以及水分等,。另外,，培養(yǎng)基還應具有適宜的pH值、一定的緩沖能力,、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓,。為了達到特定要求的研究，需要進行培養(yǎng)基配制和滅菌,。
1. 配制溶液
向容器內(nèi)加入所需水量的一部分,，按照培養(yǎng)基配方，稱取各種原料,，依次加入使其溶解,，最后補足所需水分，對蛋白胨,、肉膏等物質(zhì),，需加熱溶解，加熱過程所蒸發(fā)的水分,，應在全部原料溶解后加水補足,。
配制固體培養(yǎng)基時，先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸,，再將稱好的瓊脂加入,，繼續(xù)加熱至wan全融化,，并不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦,。
2. 調(diào)節(jié)pH值
用pH試紙(或pH電位計,、氫離子濃度比色計)測試培養(yǎng)基的pH值，如不符合需要,，可用10%HCl或10%NaOH進行調(diào)節(jié),，直到調(diào)節(jié)到配方要求的pH值為止。
3. 過濾
用濾紙,、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過濾,。用紗布過濾時，最好折疊成六層,，用濾紙過濾時,，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏斗上過濾,。
4. 分裝
已過濾的培養(yǎng)基應進行分裝,。如果要制作斜面培養(yǎng)基，須將培養(yǎng)基分裝于試管中,。如果要制作平板培養(yǎng)基或液體,、半固體培養(yǎng)基，則須將培養(yǎng)基分裝于錐形瓶內(nèi),。分裝時,，一手捏松彈簧夾，使培養(yǎng)基流出,，另一只手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養(yǎng)基,。分裝時,，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染,。裝入試管的培養(yǎng)基量,，視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培養(yǎng)基時,，每只15×150毫米的試管,，約裝3-4毫升(1/4-1/3試管高度)，如制作深層培養(yǎng)基,，每只20×220毫米的試管約裝12-15毫升,。每只錐形瓶裝入的培養(yǎng)基，一般以其容積的一半為宜,。
5. 加棉塞
分裝完畢后,，需要用棉塞堵住管口或瓶口,。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免污染,。棉塞應采用普通新鮮,、干燥的棉花制作，不要用脫脂棉,，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用,。制作棉塞時，要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度,，揪取手掌心大小一塊,，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中，用右手食指插入棉花中部,，同時左手食指與姆指稍稍緊握,，就會形成1個長棒形的棉塞。棉塞作成后,，應迅速塞入管口或瓶口中,，棉塞應緊貼內(nèi)壁不留縫隙，以防空氣中微生物沿皺折侵入,。棉塞不要過緊過松,，塞好后,，以手提棉塞,、管,、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應在管內(nèi)或瓶內(nèi),，上端露出少許棉花便于拔取,。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札，準備滅菌,。
6. 制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基
培養(yǎng)基滅菌后,，如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基，須趁培養(yǎng)基未凝固時進行,。
(1)制作斜面培養(yǎng)基,。在實驗臺上放1支長0.5-1米左右的木條,厚度為1厘米左右，將試管頭部枕在木條上,，使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜,，凝固后即成斜面培養(yǎng)基。
(2)制作平板培養(yǎng)基,。將剛剛滅過菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實驗臺上,，點燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞,，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,，左手打開培養(yǎng)皿蓋，右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中,，每皿約倒入10毫升,，以鋪滿皿底為度。鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右,，待培養(yǎng)基凝固后,，再5個培養(yǎng)皿一疊，倒置過來,，平放在恒溫箱里,，24小時后檢查，如培養(yǎng)基末長雜菌,，即可用來培養(yǎng)微生物,。