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微生物培養(yǎng)基是供微生物生長(zhǎng),、繁殖,、代謝的混合養(yǎng)料。由于微生物具有不同的營(yíng)養(yǎng)類型,，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同,，加之研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多,，使用的原料也各有差異,，但從營(yíng)養(yǎng)角度分析，微生物培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源,、氮源,、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)素以及水分等,。另外,，培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力,、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓,。為了達(dá)到特定要求的研究，需要進(jìn)行培養(yǎng)基配制和滅菌,。

 

1. 配制溶液 

  向容器內(nèi)加入所需水量的一部分,，按照培養(yǎng)基配方,，稱取各種原料，依次加入使其溶解,，最后補(bǔ)足所需水分,，對(duì)蛋白胨、肉膏等物質(zhì),，需加熱溶解,，加熱過程所蒸發(fā)的水分，應(yīng)在全部原料溶解后加水補(bǔ)足,。 

  配制固體培養(yǎng)基時(shí),，先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸，再將稱好的瓊脂加入,，繼續(xù)加熱至wan全融化,，并不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦,。

 

2. 調(diào)節(jié)pH值

用pH試紙(或pH電位計(jì),、氫離子濃度比色計(jì))測(cè)試培養(yǎng)基的pH值，如不符合需要,，可用10%HCl或10%NaOH進(jìn)行調(diào)節(jié),，直到調(diào)節(jié)到配方要求的pH值為止。

 

3. 過濾 

用濾紙,、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過濾,。用紗布過濾時(shí)，最好折疊成六層,，用濾紙過濾時(shí),，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏斗上過濾,。

 

4. 分裝

已過濾的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行分裝,。如果要制作斜面培養(yǎng)基，須將培養(yǎng)基分裝于試管中,。如果要制作平板培養(yǎng)基或液體,、半固體培養(yǎng)基，則須將培養(yǎng)基分裝于錐形瓶?jī)?nèi),。分裝時(shí),，一手捏松彈簧夾，使培養(yǎng)基流出,，另一只手握住幾支試管或錐形瓶,，依次接取培養(yǎng)基。分裝時(shí),，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口,，以免浸濕棉塞引起雜菌污染,。裝入試管的培養(yǎng)基量，視試管和錐形瓶的大小及需要而定,。一般制作斜面培養(yǎng)基時(shí)，每只15×150毫米的試管,，約裝3-4毫升(1/4-1/3試管高度),，如制作深層培養(yǎng)基，每只20×220毫米的試管約裝12-15毫升,。每只錐形瓶裝入的培養(yǎng)基,，一般以其容積的一半為宜。

 

5. 加棉塞

分裝完畢后,，需要用棉塞堵住管口或瓶口,。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免污染,。棉塞應(yīng)采用普通新鮮,、干燥的棉花制作，不要用脫脂棉,，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用,。制作棉塞時(shí)，要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當(dāng)厚度,，揪取手掌心大小一塊,，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中，用右手食指插入棉花中部,，同時(shí)左手食指與姆指稍稍緊握,，就會(huì)形成1個(gè)長(zhǎng)棒形的棉塞。棉塞作成后,，應(yīng)迅速塞入管口或瓶口中,，棉塞應(yīng)緊貼內(nèi)壁不留縫隙，以防空氣中微生物沿皺折侵入,。棉塞不要過緊過松,，塞好后,，以手提棉塞,、管,、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應(yīng)在管內(nèi)或瓶?jī)?nèi),，上端露出少許棉花便于拔取,。塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆札，準(zhǔn)備滅菌,。

 

6. 制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基

培養(yǎng)基滅菌后,，如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基,，須趁培養(yǎng)基未凝固時(shí)進(jìn)行。

(1)制作斜面培養(yǎng)基,。在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上放1支長(zhǎng)0.5-1米左右的木條,厚度為1厘米左右,，將試管頭部枕在木條上，使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜,，凝固后即成斜面培養(yǎng)基,。

 

(2)制作平板培養(yǎng)基。將剛剛滅過菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,，點(diǎn)燃酒精燈,，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞,，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,，左手打開培養(yǎng)皿蓋，右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中,，每皿約倒入10毫升,，以鋪滿皿底為度。鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右,，待培養(yǎng)基凝固后,，再5個(gè)培養(yǎng)皿一疊，倒置過來,，平放在恒溫箱里,，24小時(shí)后檢查，如培養(yǎng)基末長(zhǎng)雜菌,，即可用來培養(yǎng)微生物,。