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ELISA實驗標(biāo)準(zhǔn)曲線的技術(shù)解答
閱讀:418 發(fā)布時間:2023-7-3ELISA原理:免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理,,對待測抗體或者抗原進(jìn)行分析測定的方法,,酶聯(lián)免疫吸附分析(下稱ELISA)是免疫分析的一種,,分三個部分組成:免疫識別,信號輸出和數(shù)據(jù)處理,。標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會直接影響到ELISA實驗的結(jié)果,,甚至是關(guān)系到實驗的成敗。那么在ELISA實驗中,,這一方面該如何處理呢,?下面對ELISA實驗標(biāo)準(zhǔn)曲線的技術(shù)解答內(nèi)容:
1.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,,即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi),,包括上限和下限。而對于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線,,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度*陡段,,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
2.采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度,,這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離,。
3.樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出來的,所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,,否則后面的實驗結(jié)果無從談起,。
4.做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎樱话銇碚f,,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999,。
6.檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時,,應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行,以減少高濃度對低濃度的影響,,提高準(zhǔn)確性,。
7.標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個點,但至少要保證有5個點,。
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方法:
標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度得到后,,可通過計算器、Excell或SPSS統(tǒng)計軟件進(jìn)行繪制,,并得到相關(guān)的回歸方程(即計算公式)和相關(guān)系數(shù)(回歸系數(shù)),。Excell軟件比較好用一些;SPSS也行,,不過是英文的,,初學(xué)者不是很容易掌握;計算器嘛太麻煩了,,所以現(xiàn)在一般不用,。