日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

產(chǎn)品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊

當(dāng)前位置:
上海邦景實業(yè)有限公司>技術(shù)文章>把控細(xì)胞凍存必看事項

技術(shù)文章

把控細(xì)胞凍存必看事項

閱讀:334          發(fā)布時間:2023-6-27

   細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,也是保持細(xì)胞活性和增殖能力的重要手段,。細(xì)胞可以通過被暫時休眠(凍存),, 等到需要時再被輕輕喚醒(復(fù)蘇)。低溫下,,活細(xì)胞中的生物和化學(xué)反應(yīng)都會大大降低,,為細(xì)胞長期凍存提供了可能。冷凍對大多數(shù)活生物體都是致命的,,細(xì)胞凍存是利用冷凍保護(hù)劑來降低冰點(diǎn),,緩慢凍結(jié)細(xì)胞的過程中,細(xì)胞內(nèi)水分透出細(xì)胞,,使細(xì)胞凍結(jié)中冰晶形成減少,,從而避免了由于冰晶形成對細(xì)胞中生命活性物質(zhì)的一系列損傷。細(xì)胞凍存時利用低溫降低細(xì)胞代謝,,使細(xì)胞處于停止生長的“休眠"狀態(tài),,等需要使用的時候再進(jìn)行復(fù)蘇操作。細(xì)胞儲存在-70℃冰箱中,,可以保存一年,;若儲存在-196℃的液氮環(huán)境中,理論上可以實現(xiàn)長期永存,。

1,、細(xì)胞凍存的常見方法

  細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的關(guān)鍵要點(diǎn)是慢凍快融。細(xì)胞凍存的效果主要與降溫步驟,、凍存保護(hù)液的使用,、凍存溫度、復(fù)溫速率及用于凍存的細(xì)胞生長狀態(tài)有關(guān),。降溫速率過快容易引起細(xì)胞內(nèi)冰晶損傷,,所以為防止細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰必須采用一個“慢"的降溫過程,并使用凍存保護(hù)劑,,即凍存液,。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜(DMSO)作保護(hù)劑,。

  根據(jù)降溫速度區(qū)分,,細(xì)胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存。傳統(tǒng)的凍存方法是將冷凍管置于4℃ 30分鐘,、-20℃ 30分鐘,、-80℃過夜再轉(zhuǎn)液氮,。這種凍存方法步驟多,,而且需要遵守幾個時間點(diǎn),,容易被遺忘,對于繁忙的實驗人員而言不那么友好,。而程序降溫方法,,采用降溫速率-1℃~-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時,,可增至-5℃~-10℃/min,,再放至-196℃液氮保存。常規(guī)的程序降溫凍存方法較為復(fù)雜,、費(fèi)時,需要儀器設(shè)備花費(fèi)較高,,所以非程序降溫凍存方法便應(yīng)運(yùn)而生,,它能大大簡化凍存流程,細(xì)胞可直接置于-80°C冰箱完成凍存過程,,更為簡便高效,。

2、 細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的最佳時間

細(xì)胞在體外生長期間,,通常分為三個階段:潛伏期,、指數(shù)生長期和平臺期。潛伏期通常是細(xì)胞剛剛傳代,,此時細(xì)胞開始貼附基質(zhì)和伸展骨架,,代謝活動集中在粘附蛋白和骨架蛋白的表達(dá),細(xì)胞數(shù)量在這段時間內(nèi)幾乎沒有增加,。

隨后,,細(xì)胞開始指數(shù)生長期,轉(zhuǎn)錄翻譯過程旺盛,,胞內(nèi)物質(zhì),、信號傳遞迅速,細(xì)胞數(shù)量迅速增長,。如果在這個時期凍存,,實際上是強(qiáng)行將細(xì)胞凍結(jié)在代謝的某一時刻,勢必造成對解旋的DNA,、轉(zhuǎn)錄翻譯中的RNA和蛋白的機(jī)械損傷,,增加個別環(huán)節(jié)發(fā)生錯誤的風(fēng)險。

隨著細(xì)胞數(shù)量的增長,,培養(yǎng)容器內(nèi),,細(xì)胞匯合達(dá)到90%以上,。大部分細(xì)胞因為“接觸抑制"而停止高速代謝和增殖,胞內(nèi)活動趨于平緩,。所以,,建議在剛剛進(jìn)入平臺期時凍存細(xì)胞,既可以獲得足量的細(xì)胞,,也不會對細(xì)胞造成過多的機(jī)械損傷,。

3、細(xì)胞凍存的注意事項:
1.  為保持細(xì)胞最大存活率,,一般都采用慢凍存融的方法,。
2.  凍存物距液氮面越近溫度越低。標(biāo)準(zhǔn)的低凍速度為-1℃~12℃/ 分鐘,,當(dāng)溫度下降達(dá)-25℃時,,下降速度可增至-5~-10℃/ 分鐘,到-100℃時則可迅速凍入液氮中,。因此要適當(dāng)掌握凍存物下降入液氮中的速度,,過快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出,太慢則促冰晶形成,。
3.  初次凍存者在下降凍存時,,宜先用細(xì)木棒伸入罐中探測液面位置,然后需用溫度計與凍存物并行的辦法,,以觀測下降凍存物的速度,、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關(guān)系,當(dāng)已掌握以上各參數(shù)和凍存技術(shù)熟練后,,僅按下降時間和下降距離便可獲理想凍存效果,。
4.  各種細(xì)胞對凍存速度的要求也不一樣;上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞耐受性可能大些,,骨髓干細(xì)胞-2~-3℃/ 分鐘合適,;胚胎細(xì)胞耐受性較小,不宜太快,??傊谝婚_始時,下降速度不能超過-10℃/ 分鐘,。
5.  用什么防護(hù)劑合適和用量多大,,要依細(xì)胞而定,初代培養(yǎng)細(xì)胞用 DMSO 較好,,一般細(xì)胞可用甘油,;用量以較小為好。有人認(rèn)為人皮膚上皮細(xì)胞貯存在 20%-30% 甘油中很好。
6.  原則上細(xì)胞在液氮中可貯存多年,,但為妥善起見,,凍存一年后,應(yīng)再復(fù)蘇培養(yǎng)一次,,然后再繼續(xù)凍存,。
7. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護(hù)工作,,以免凍傷,。
8. 注意自身的安全,對于來自人源性或病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心,。操作過程中,,應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生,小心有毒性試劑例如 DMSO,,并避免尖銳物品傷人等,。


收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功,!我們將在第一時間回復(fù)您~

對比框

產(chǎn)品對比 產(chǎn)品對比 聯(lián)系電話 二維碼 在線交流

掃一掃訪問手機(jī)商鋪
021-52960951
在線留言