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技術(shù)文章

支原體污染細(xì)胞清除方案

閱讀:485          發(fā)布時(shí)間:2023-5-29

支原體細(xì)胞污染是最麻煩的,,通常來源有這幾個(gè):

1、已受污染的細(xì)胞

2,、操作人員的疏失

3,、已受污染的培養(yǎng)基、血清

4、操作環(huán)境不良,、實(shí)驗(yàn)器具不潔等,。由于支原體為人體口腔中之正常菌叢,實(shí)驗(yàn)室之操作人員的污染亦可能為污染源,,須十分注意,。而萬一細(xì)胞已受支原體污染時(shí),最佳的處理原則為將細(xì)胞高壓滅菌后丟棄,,以免污染其它潔凈的細(xì)胞株,。

8.jpg

支原體污染細(xì)胞后,必須要清除支原體,,清除方案有以下:

1,、對(duì)于非重要的細(xì)胞,如培養(yǎng)中的細(xì)胞,、WCB的細(xì)胞等,,將培養(yǎng)物與用過的培養(yǎng)基滅活后丟棄即可。對(duì)于較為重要的細(xì)胞,,如來源珍貴或?qū)嶒?yàn)室中細(xì)胞保藏量較小等可以采用以下(2)-(8)的方法,。

2、用MRA處理:用支原體清除劑(Mycoplasma Removal Agent)處理細(xì)胞,,作用濃度為 25μg/ml,,兩周可以清除支原體。

3,、用清洗純化法清除支原體污染的方法:細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)馴化→優(yōu)質(zhì)細(xì)胞群的篩選→細(xì)胞清洗→反復(fù)離心洗滌,,其原理是利用離心力、細(xì)胞,、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達(dá)到清除支原體的目的,。由于支原體個(gè)體小且除發(fā)酵支原體外多為細(xì)胞外寄生,所以通過反復(fù)洗滌細(xì)胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低至ji 限. 如結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用,可達(dá)到更好的效果,。

4,、藥物輔助加溫處理:先用藥物處理后,再將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時(shí),,可殺死支原體,,但對(duì)細(xì)胞有不良影響。

5,、使用支原體特異性血清:用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染,,因特異抗體可抑制支原體生長(zhǎng),故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性,,并且5個(gè)月后仍為陰性,。

6、動(dòng)物體內(nèi)接種除菌法:把受支原體污染的腫瘤細(xì)胞接種在同種動(dòng)物皮下或腹腔中,借動(dòng)物免疫系統(tǒng)消滅支原體,,而腫瘤細(xì)胞卻能在體內(nèi)繼續(xù)生長(zhǎng),,待一定時(shí)間后,從體內(nèi)取出細(xì)胞再進(jìn)行培養(yǎng)繁殖,。

7、巨噬細(xì)胞吞噬法:從動(dòng)物腹腔采取巨噬細(xì)胞,,為排除其它細(xì)胞成分,,可先進(jìn)行純化,然后再加入被支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)液中混合培養(yǎng),。在培養(yǎng)過程中,,為檢查支原體是否已被消除干凈,可利用支持物培養(yǎng)法驗(yàn)證,,取出支持物逐日染色,、鏡檢觀察,至支原體已被消除干凈為止,。

8,、使用支原體清除培養(yǎng)基,每2~3天更換1次新鮮培養(yǎng)液,,換液時(shí)用無菌的平衡鹽溶ye洗滌細(xì)胞1~2次,;期間如果細(xì)胞密度過大,請(qǐng)保持細(xì)胞密度適當(dāng)(貼壁細(xì)胞可能需要用yi 酶消化),,并更換新的培養(yǎng)器皿,,3天之后,即可見明顯清除效果,;處理15天后,,可以用支原體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)支原體是否殺滅*,;如果仍有支原體殘留,,可以考慮再處理6天;為避免細(xì)胞再次受到“支原體"的污染,,以后每隔1個(gè)月進(jìn)行支原體的常規(guī)檢測(cè),,以保證沒有新的支原體污染。

注:支原體污染時(shí)細(xì)胞表現(xiàn)為長(zhǎng)得不好,,也不死亡,,同時(shí),培養(yǎng)基又是清亮的,,時(shí)間長(zhǎng)達(dá)一周也沒有什么變化,,這時(shí)基本上可以判斷出是支原體污染了。



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