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聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（Polymerase chain raction ,PCR）是一種在體外擴增特定DNA片段的方法,，具有特異、敏感,、產(chǎn)率高,、快速、簡便,、重復(fù)性好,、易自動化等突出優(yōu)點，可用很短時間使目的基因或某一片段擴增十萬乃至幾百萬倍,。

一,、PCR常見類型

常規(guī)PCR：

直接PCR是指直接從樣品擴增目標(biāo)DNA，無需進行核酸分離純化,。

熱啟動PCR：

熱啟動PCR常用于增強PCR擴增的特異性,。該方法主要利用抗體、親合配體,、適體或化學(xué)修飾物等酶修飾酶,，來抑制室溫下的DNA聚合酶的活性。這種修飾使得在PCR體系配制階段引物與模板,、引物與引物之前的結(jié)合能力降低,，從而避免了非特異性擴增。

巢式PCR：

巢式PCR是標(biāo)準(zhǔn)PCR的一種演變,，其增強了反應(yīng)特異性和目標(biāo)擴增子的產(chǎn)量,。

快速PCR：

在快速PCR中,，通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增，且不會影響擴增產(chǎn)量和效率,?？焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶，這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸,。

高GC含量PCR：

具有高GC含量（>65%）的DNA模板由于G和C堿基間的強氫鍵影響,，比較難以擴增。富含GC的序列同時也涉及二級結(jié)構(gòu),。因此,，富含GC的序列可導(dǎo)致DNA聚合酶沿模板擴增時“卡頓"并干擾DNA合成。

多重 PCR:

多重PCR可在同一PCR反應(yīng)管中同時擴增多個不同的片段,。多種PCR不僅意味著節(jié)省時間,、試劑和樣品，還能夠同時對比多個擴增子

長片段 PCR:

長片段PCR通常是指擴增大于5kb的DNA片段,。長片段PCR傳統(tǒng)上使用 Taq DNA 聚合酶（用于快速延伸）和高保真酶（用于提高準(zhǔn)確性）的混合物,。

定量PCR:

序列的擴增程度（得率）取決于模板起始量，PCR常用于對樣品中的DNA進行定量,，其中,，最常見的應(yīng)用是 基因表達定量。

二,、PCR反應(yīng)基本步驟

變性：根據(jù)DNA高溫變性的原理,，將反應(yīng)體系溫度升至變性溫度（高于模板熔點，約95℃）,，使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板（單鏈）,。[95℃，30s]

退火：將反應(yīng)體系溫度驟降至退火溫度（低于引物熔點約55℃）,，是PCR引物與PCR模板3’端雜交,，稱為退火。[55~65℃,，30s]

延伸：將反應(yīng)體系溫度升至延伸溫度（約72℃）,，DNA聚合酶按照堿基配對原則在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互補鏈，使目的DNA拷貝數(shù)增加1倍,。[72℃,，30~60s]