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   在Elisa實驗步驟中,，溫育是的一項要點。而顯色是Elisa中的zui后一步溫育反應(yīng),，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物,。Elisa實驗步驟溫育反應(yīng)之顯色：

    反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi),，陰性孔可保持無色,，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進行,。在定量測定中,，加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測定的顯色可在室溫進行,，時間一般不需要嚴(yán)格控制,，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時間，及時判斷,。

    OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,，再延長反應(yīng)時間，可使本底值增高,。

    OPD底物液受光照會自行變色,，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進行，顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng),。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。

    TMB受光照的影響不大,，可在室溫中置于操作臺上,，邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性,，宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果,。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達ding峰,，隨即逐漸減弱,，至2小時后即可wan全消退至無色。TMB的終止液有多種,，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止,。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪,，是目視判斷的良好終止劑。此外,，各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色,，此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。