技術(shù)文章
ELISA標(biāo)準(zhǔn)?加樣方法
閱讀:276 發(fā)布時間:2022-7-25酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)因其具有敏感性高,、特異性強等優(yōu)點,,被廣泛應(yīng)用于臨床檢測中的各種抗原和抗體的測定。盡管ELISA操作簡單,,但是小實驗里也蘊含著大文章,ELISA操作各個環(huán)節(jié)對實驗的檢測效果影響較大,,稍不注意就會產(chǎn)生假陽性或假陰性的結(jié)果,。
因ELISA的靈敏度較高,則應(yīng)該按規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù),,以降低非特異性反應(yīng),,使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。 加樣品時,,單孔用量要求:≥20ul/指標(biāo),,如需要做2個復(fù)孔則血量≥60ul/指標(biāo)。如果用量充足,,最好提供50ul/孔/指標(biāo),。具體用量也需根據(jù)試劑盒的要求而定。 吸取樣品時,,加樣槍頭不應(yīng)粘附多余的液體,;加樣時不可90度向孔中滴加液體,否則會導(dǎo)致液體殘留在吸頭上,,加樣不準(zhǔn)確,。正確加樣方法應(yīng)為45度,吸頭貼著孔壁和液面的交界處加入,。
加樣時速度不可過快,,否則無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性;要避免樣品加在孔壁上部而產(chǎn)生非特異性吸附,。不可將樣品濺出以避免對鄰近孔產(chǎn)生污染,。