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一抗的選擇需要考慮方面
閱讀:421 發(fā)布時間:2022-6-28一抗選擇的好壞對免疫組化實驗的至關重要,一抗盡量選擇單克隆抗體,,還要注意其抗體來源(兔抗,、鼠抗或者其他)要與二抗匹配。一抗的選擇要點和技巧
1,、單克隆和多克隆抗體的選擇
由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體,。單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結合,,就像導dan精確地命中目標一樣。另一方面,,即使是同一個抗原決定簇,,在機體內也可以由好幾種克隆來產生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,,稱為多克隆抗體,。在抗原抗體反應中,一般單克隆抗體特異性強,,但親和力相對小,,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,,但抗體的親和力強,,靈敏度高,但易出現非特異性染色(可以通過封閉等避免),。
2,、種屬來源
一般兔來源的多是多克隆,;而小鼠來源的多是單克隆,,但也有另外。根據此來源來選擇相應的二抗,。
3,、種屬反應性的選擇
這一點很重要,表明這種抗體可能存在種屬差異,,且這種抗體適合檢測哪種種屬動物體內的抗原。
4,、應用范圍的選擇
有的一抗只能用于 WB ( Western blotting)或免疫組化,、免疫熒光、免疫沉淀等,;甚至表明石蠟切片或冰凍切片,。