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單克隆抗體技術B淋巴細胞在抗原的刺激下,，能夠分化,、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力,。B細胞的這種能力和量是有限的,，不可能持續(xù)分化增殖下去,，因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的,。將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞,，再進一步克隆化,，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤細胞的無限分裂的能力，又具有產生特異性抗體的B淋巴細胞的能力,。將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養(yǎng)或注入小鼠腹水內即可獲得大量的高效,、單一的特異性抗體。這種技術即稱為單克隆抗體技術,。

單克隆抗體技術具體過程：

1,、免疫脾細胞的制備 

制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質,。免疫方法同一般血清的制備,，也可采用脾內直接免疫法。

2,、骨髓瘤細胞的培養(yǎng)與篩選 

在融合前,，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養(yǎng)基篩選,，防止細胞發(fā)生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活）。骨髓瘤細胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，融合前24h換液一次,，使骨髓瘤細胞處于對數生。

3,、細胞融合的關鍵:

1）,、技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如,，供者淋巴細胞沒有查到免疫應答,。這必然要失敗的。

2）,、融合試驗最大的失敗原因是污染,，融合成功的關鍵是提供一個干凈的環(huán)境，以及適宜的無菌操作技術,。

4,、陽性克隆的篩選 應盡早進行

通常在融合后10天作第一次檢測，過早容易出現假陽性,。檢測方法應靈敏,、準確、而且簡便快速,。具體應用的方法應根據抗原的性質,，以及所需單克隆抗體的功能進行選擇。常用的方法有 RIA法,、 ELISA法和免疫熒光法等,。其中ELISA法，RIA法最準確,。陽性克隆的篩選應進行多次,，均陽性時才確定為陽性克隆進行擴增。

5,、克隆化 

克隆化的目的是為了獲得單一細胞系的群體,。克隆化應盡早進行并反復篩選,。這是因為初期的雜交瘤細胞是不穩(wěn)定的,，有丟失染色體的傾向。反復克隆化后可獲得穩(wěn)定的雜交瘤細胞株,。