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細(xì)胞凍存操作步驟：

1,、預(yù)先配制凍存液：

     凍存液比例多種，根據(jù)細(xì)胞的特性進(jìn)行調(diào)整凍存液的比例：

     5%—10%DMSO  +  20%—90%血清  +  0%—70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液,；

2,、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗1-2次,；去掉培養(yǎng)瓶里的殘余血清；

3,、加入適量胰酶（濃度一般為0.25%）,，使胰酶覆蓋整個(gè)瓶，放入培養(yǎng)箱消化,；

4,、細(xì)胞消化0.5-2min（具體時(shí)間根據(jù)鏡下形態(tài)判斷），顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞,，細(xì)胞胞質(zhì)回縮,，細(xì)胞間不再連接成片，此時(shí)        加入*培養(yǎng)基終止消化,；

5,、用巴氏吸管輕輕吹打細(xì)胞，形成細(xì)胞懸液,，將細(xì)胞懸液1000r/min左右條件下離心3-5min,；

6、棄上清,，加入適量預(yù)先配制好的凍存液,，巴氏吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù),，調(diào)節(jié)凍存液中的細(xì)胞最終密度為                5×106/ml～1×107/ml,；

7、將細(xì)胞分裝入凍存管中,，每管1-1.5ml,；

8、凍存管標(biāo)記細(xì)胞名稱(chēng),，凍存時(shí)間,，操作者及細(xì)胞代數(shù)信息。

     對(duì)于懸浮細(xì)胞凍存,，則直接收集離心細(xì)胞,，除去胰酶消化的步驟，其他步驟相同。