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細胞凍存操作步驟：

1、預先配制凍存液：

     凍存液比例多種,，根據(jù)細胞的特性進行調(diào)整凍存液的比例：

     5%—10%DMSO  +  20%—90%血清  +  0%—70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液,；

2、取對數(shù)生長期的細胞,，去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗1-2次；去掉培養(yǎng)瓶里的殘余血清,；

3,、加入適量胰酶（濃度一般為0.25%），使胰酶覆蓋整個瓶,，放入培養(yǎng)箱消化,；

4、細胞消化0.5-2min（具體時間根據(jù)鏡下形態(tài)判斷）,，顯微鏡下觀察細胞,，細胞胞質(zhì)回縮,，細胞間不再連接成片,，此時        加入*培養(yǎng)基終止消化；

5,、用巴氏吸管輕輕吹打細胞,，形成細胞懸液，將細胞懸液1000r/min左右條件下離心3-5min,；

6,、棄上清，加入適量預先配制好的凍存液,，巴氏吸管輕輕吹打使細胞均勻,，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中的細胞最終密度為                5×106/ml～1×107/ml,；

7,、將細胞分裝入凍存管中,，每管1-1.5ml；

8,、凍存管標記細胞名稱,，凍存時間，操作者及細胞代數(shù)信息,。

     對于懸浮細胞凍存,，則直接收集離心細胞，除去胰酶消化的步驟,，其他步驟相同,。