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蛋白定量的方法有很多種，應(yīng)用較多的主要有兩種：

BCA蛋白定量檢測法和Bradford蛋白定量檢測法，市售的蛋白定量試劑盒也多基于上述兩種檢測方法而開發(fā)的,。兩種方法均需配制蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,，蛋白與定量試劑經(jīng)過一定時間的反應(yīng)（BCA法反應(yīng)為37℃,、20-30min,，Bradford法反應(yīng)一般為37℃，5min）,，酶標(biāo)儀讀取樣品的OD值,，繪制的蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算WB蛋白的濃度,。兩種檢測方法相比BCA法,，Bradford法不僅節(jié)省反應(yīng)時間，也無需配置反應(yīng)試劑,，簡單,、快速、好用,，推薦Bradford法測定蛋白濃度,。

嚴(yán)格來說，每次的蛋白濃度測定均需配制新鮮蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,，保證每次測到的蛋白濃度的準(zhǔn)確性,。然而，WB法評估蛋白表達(dá)水平本身就是一種半定量或者相對定量,，因此在實(shí)際蛋白樣本準(zhǔn)本及濃度測定時只需保證均一性即可,，即使用同樣的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算同一批蛋白的濃度,，如果計(jì)算準(zhǔn)備即可保證蛋白上樣時內(nèi)參水平基本一致,。因此，在實(shí)際操作中我們只需測定一次標(biāo)準(zhǔn)品的OD值,、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，即可用此曲線來計(jì)算后續(xù)實(shí)驗(yàn)蛋白的濃度，節(jié)省時間和試劑,。