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操作步驟：

1,、取出組織支承器，放平擺好組織,，周邊滴上包埋劑,，速放于冷凍臺上冰凍，用吸熱器壓住組織,，至包埋劑與組織凍結(jié)成白色冰體即可切片（1~3分種）,。

2、將冷凍好的組織塊,，夾緊于切片機(jī)持承器上,，啟動(dòng)粗進(jìn)退鍵，轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕,，將組織修平,。

3、調(diào)好欲切的厚度,，根據(jù)不同的組織而定,，原則上是細(xì)胞密集的薄切，纖維多細(xì)胞稀的可稍為厚切,，一般在5 ～10μm間,。

4、調(diào)好防卷板。制作冰凍切片,，關(guān)鍵在于防卷板的調(diào)節(jié)上,，這就要求操作者要細(xì)心，準(zhǔn)確地將其調(diào)較好,，調(diào)校至適當(dāng)?shù)奈恢?。切片時(shí)，以切出完整,、平滑的切片為準(zhǔn),。切好的組織在干凈的玻片上黏附時(shí)順著一個(gè)方向稍微用力輕輕一帶 ,可避免組織攤片過程中皺折 ,保證組織結(jié)構(gòu)的完整及切片的美觀。

注意點(diǎn)：

①包埋劑的選用：包埋劑是對冷凍切片質(zhì)量一重要影響因素,，包埋劑用量要適宜,，過多或過少都會影響標(biāo)本冷凍質(zhì)量。常用的有三種包埋劑OCT劑,、B超藕合劑以及普通膠水,。B超藕合劑適用于細(xì)胞豐富質(zhì)地較嫩的組織,普通膠水或 OCT劑適用于纖維豐富質(zhì)地偏硬組織。（OCT包埋劑驟冷時(shí)固化,，其冷凍速度和軟硬韌度與組織相近，其還具有水溶性,，不影響染色等優(yōu)點(diǎn),。）

②組織塊過小：先將少量膠擠在托架上預(yù)先放在冰凍機(jī)中冷凍,約30秒鐘左右待膠凝固時(shí)將小組織放上,組織周圍再加一些膠,再次置于冷凍機(jī)中冷凍,這樣組織被墊高,就能快速切出高質(zhì)量的切片,。

③冷凍箱及冷凍頭的溫度高低,，要根據(jù)不同的組織而定。溫度過低會導(dǎo)致組織塊過硬,切片碎裂,出現(xiàn)梯田狀薄厚不均或空洞;反之,溫度過高,組織塊硬度不夠 ,切片不易成形或成皺褶,。數(shù)據(jù)圖1供參考,。

④當(dāng)切片時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)冰凍過度時(shí),，可將冰凍的組織連同支承器取出來,，在室溫停留片刻，再行切片,，或者用口中哈氣,，或者用大拇指按壓組織塊，以此來軟化組織,，再行切片,。另者，調(diào)高冰凍點(diǎn),。

⑤用于附貼切片的載玻片,，不能存放于冷凍處，于室溫存放即可。因?yàn)楫?dāng)附貼切片時(shí),，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差,，當(dāng)溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時(shí)，由于兩種物質(zhì)間溫度的差別,，當(dāng)它們碰撞在一起時(shí),，分子彼此間發(fā)生轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力，使切片與載玻片牢固地附貼在一起,。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片,，由于溫度相同，沒有發(fā)生上述的現(xiàn)象,。