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樣本采集,、存放及運(yùn)輸：

1,、樣本采集：各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集；

2,、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,，-70℃以下可長(zhǎng)期保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；

3,、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸,。

組成及試劑配制:

1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2,、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶,，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,，蓋好后室溫靜置大約10分鐘,，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L,，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L,，50 U/L,，25 U/L，12.5 U/L,，6.25 U/L,，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L,。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推,。

3,、 樣品稀釋液：1×20ml。

4,、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml,。 

5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml,。   

實(shí)驗(yàn)步驟：

1,、產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解,。

2,、兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。

3,、RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。

4,、RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀,。混勻后,，4℃下7000rpm離心5分鐘,。

5、RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。

6、溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度,。