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小鼠elisa試劑盒原理與標(biāo)本處理及要求
閱讀：406 發(fā)布時(shí)間：2020-12-9小鼠elisa試劑盒原理：
本小鼠elisa試劑盒系由預(yù)包被豬瘟病毒重組E2蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)豬血清、血漿樣本中豬瘟病毒抗體,。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬瘟病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬瘟病毒抗體,。
小鼠elisa試劑盒操作注意：
1.不同的試劑盒因工藝和操作方法略有不同,，務(wù)必按照所用人Opiorphin蛋白(OPI)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格操作，否則容易產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果的不確定性.
2.若不同批號(hào)小鼠elisa試劑盒的不同組分(A液或酶工作液),，或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用,，有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高，花板等情形,。
3.反應(yīng)時(shí)間的誤差,，做大量標(biāo)本時(shí)，一孔和后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大,。
4.臨界值附近標(biāo)本波動(dòng)為正?，F(xiàn)象，任何試劑均不可避免,?？梢钥紤]將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。
5.加樣時(shí)樣品量誤差,，對(duì)于陰或很陽(yáng)的標(biāo)本影響不大,，但對(duì)閾值附近的標(biāo)本影響，建議校對(duì)加樣器,。
小鼠elisa試劑盒樣本處理及要求：
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測(cè),，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱(chēng)重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比,，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融,。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,，取上清檢測(cè)。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測(cè),，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響*后檢測(cè)結(jié)果,，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。