化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
其它elisa試劑盒樣本收集與技術(shù)原理
閱讀：230 發(fā)布時(shí)間：2020-12-2其它elisa試劑盒原理：
免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體其它elisa試劑盒之間的特異結(jié)合反應(yīng),，所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開優(yōu)質(zhì)的原料，如抗原抗體,，酶等,。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備,。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,，各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。
其它elisa試劑盒樣品收集:
1. 血清：全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測(cè),，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管,。
2. 血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2,，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè),。避免使用溶血,，高血脂樣品。
3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果）,，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比,，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,，或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,，取上清檢測(cè),。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：取其它elisa試劑盒上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片,。取上清檢測(cè),。
5. 其它生物樣品：1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測(cè)
6. 樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除,。
7. 樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃,，若不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝,，凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),，或-80℃（6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)），避免反復(fù)凍融,。
8. 如果您的樣品中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品高值,，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋（建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn),，以確定稀釋倍數(shù)）,。
其它elisa試劑盒技術(shù)原理：
1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。
2. 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,。
3. 酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,，又保留酶的活性。
4. 受檢標(biāo)本與固相載體其它elisa試劑盒表面的抗原或抗體起反應(yīng),。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。
5. 此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。
6. 加入酶反應(yīng)的底物后,，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),，
故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析,。測(cè)定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復(fù)性好,。以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù),。