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小鼠白介素-5(IL-5)ELISA試劑盒操作步驟:

閱讀:247          發(fā)布時(shí)間:2020-7-2

小鼠白介素-5(IL-5)ELISA試劑盒操作步驟:
1,、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,,然后再加待測樣品10µl(樣品終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻,。
2、溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘,。
3,、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
4、洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此
重復(fù)5次,拍干,。
5,、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50µl,空白孔除外,。
6,、顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色
10 分鐘.
7、終止:每孔加終止液50µl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
8、測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 
 

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