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1,、合適的細(xì)胞培養(yǎng)基
合適的細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的重要的條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),，而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。
2,、血清
目前，大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清,。血清是細(xì)胞培養(yǎng)液中重要的成分之一,，含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的多種生長(zhǎng)因子及其它營(yíng)養(yǎng)成分。
3,、無菌無毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境
無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件,。
在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對(duì)微生物和有毒物的防御能力,，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自身代謝物質(zhì)積累,，可導(dǎo)致細(xì)胞中毒死亡,。因此，在體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),，必須保持細(xì)胞生存環(huán)境無菌無毒，及時(shí)清除細(xì)胞代謝產(chǎn)物,。
4,、恒定的細(xì)胞生長(zhǎng)溫度
維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長(zhǎng)，必須有恒定而適宜的溫度,。不同種類的細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)溫度要求也不同，人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36,。5℃±0,。5℃,，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響,，甚至死亡,。
培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng)，溫度上升不超過39℃時(shí),，細(xì)胞代謝與溫度成正比；人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí),，即能受到一定損傷,，但仍有可能恢復(fù),；在40-41℃1小時(shí)，細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷,，僅小半數(shù)有可能恢復(fù),；41-42℃1小時(shí)，細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷,，大部分細(xì)胞死亡,，個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí),，細(xì)胞全部死亡。
相反,，溫度不低于0℃時(shí),，對(duì)細(xì)胞代謝雖有影響，但并無傷害作用,；把細(xì)胞放入25-35℃時(shí),，細(xì)胞仍能生存和生長(zhǎng),，但速度減慢；放在4℃數(shù)小時(shí)后,，再回到37℃培養(yǎng),，細(xì)胞仍能繼續(xù)生長(zhǎng),。細(xì)胞代謝隨溫度降低而減慢。當(dāng)溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí),，細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡,。
但是，如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護(hù)劑（二甲亞砜或甘油）,，可在深低溫下如-80℃或-196℃（液氮）長(zhǎng)期保存。
5,、合適的氣體環(huán)境
氣體是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一,，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。