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技術(shù)文章

elisa試劑盒要開發(fā)新的小分子RNA的提取方法

閱讀:272          發(fā)布時間:2020-1-3

多數(shù)傳統(tǒng)RNA分離試劑盒目的是為回收mRNA 而設(shè)計的,,往往會棄去較小的RNA分子以減少干擾提高mRNA得率,。因此這些步驟會導(dǎo)致一些小分子RNAs,如微小RNAs的損失,。另外,,此類方法往往涉及酚/lv仿等有毒化學(xué)物質(zhì)的抽提。多數(shù)RNA純化試劑盒采用的標準玻璃纖維濾膜或者硅膠濾膜,,不能有效的回收更小的小分子RNA,,如微小RNA。

elisa試劑盒由于微小RNA存在的廣泛性和多樣性,,提示微小RNA可能有非常廣泛多樣的生物功能,。盡管對微小RNA的研究還處于初級階段,據(jù)推測微小RNA在高級真核生物體內(nèi)對基因表達的調(diào)控作用可能和轉(zhuǎn)錄因子一樣重要并可能代表在一個新發(fā)現(xiàn)的層次上的基因表達調(diào)控方式,。對一部分微小RNA的研究分析提示微小RNA參與生命過程中一系列的重要進程,,包括早期發(fā)育,細胞增殖,,細胞凋亡,,細胞死亡,脂肪代謝和細胞分化以及和癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),??梢姡瑢π》肿覴NA的研究日益受到重視,。然而,,進行小分子RNA分析的第yi個關(guān)鍵步驟就是從生物樣本中純化小分子RNAs。

微小RNA的分子量相對較小,,對于常規(guī)的核酸提取法都不適用,。微小RNA只有在乙醇濃度很高的條件下(大于70% )才能與核酸提取柱相結(jié)合,從而得到分離,。但在該濃度的乙醇條件下,,絕大多數(shù)的其他分子,特別是大分子都會被沉淀,,使分離無法進行,。 目前多采用利用毒性很強的酚以及l(fā)v仿等有機試劑,,首先將大分子沉淀除掉,然后純化總的核酸,。除了使用的試劑有毒外,,大分子的DNA和RNA仍然會影響對微小RNA的進一步分析。因此,,有必要開發(fā)新的小分子RNA的提取方法,。

elisa試劑盒由于小分子RNA可能參與分化、發(fā)育,、組織生長,、脂肪代謝等生理過程,在不同的組織和發(fā)育階段的表達水平有所不同,,進一步了解小分子RNA的生物功能具有重要意義,。 

微小RNA(microRNA,簡稱miRNA)是生物體內(nèi)源長度約為20-23個核苷酸的非編碼單鏈小分子RNA,,通過與靶mRNA的互補配對而在轉(zhuǎn)錄后水平上對基因的表達進行負調(diào)控,, 導(dǎo)致mRNA的降解或翻譯抑制。

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