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冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存,。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存,。-20℃不可超過1小時,，以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些,。

操作步驟 :

　　1,、將長滿細胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。 　　

2,、加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,，使瓶底細胞都浸入溶液中。 　　

3,、瓶口塞好橡皮塞,，放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移,，原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,，在還未漂起時將胰酶棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化,。 　　觀察消化也可以用肉眼,，當見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘,。 　　

4,、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中,，實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng),。第二天觀察貼壁生長情況。 　　附：消化液配制方法： 　　稱取0.25克胰酶蛋白酶（活力為1：250）,，加入100ml無Ca2+,、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過濾除菌,，4℃保存,，用前可在37℃下回溫。