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不同類型的樣本的處理方法
閱讀：680 發(fā)布時間：2019-6-14
不同類型的樣本的處理方法
sa試劑盒通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清,、血漿,、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的,。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步。
細胞裂解液
1） 吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,，用胰酶消化細胞,，加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省略,。
2） 收集細胞懸液,，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基,，用預冷的PBS潤洗3次,。
3） 加入適量的預冷PBS或細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸,。
4） 將樣品放入-20℃或-80℃,，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品,，反復凍融幾次,，使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎,，以達到裂解的目的,。
5） 4℃ 10000×g 離心10min，除去細胞碎片,，取上清,，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融,。
5,、組織勻漿液
1） 將組織樣本用PBS (0.01 [錨點] [錨點] M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質,。
2） 將組織塊稱重,，記錄后剪碎，碎塊應盡量小，便于勻漿得更充分
3） 將組織按一定的比例加入預冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿,，勻漿時置于冰上或冰浴中,。（通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿，例如1g的組織樣本對應9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,，檢測后計算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數(shù)）
4） 吸取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~10min,，取上清,，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融,。
6,、 尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min,，取上清即可檢測,。
ELISA試劑盒總的來說，因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量,，所以應保證所有樣本均為澄清的液體,，沉淀或懸浮物都應離心去除。
為了保證檢測的準確性,，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測,；4℃保存的樣本應在1周內(nèi)進行檢測。
另外,，還應保證樣本不含NaN3,，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導致假陰性的結果.
不同類型的樣本的處理方法
sa試劑盒通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,，如血清,、血漿、尿液,、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步,。
細胞裂解液
1） 吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,，用胰酶消化細胞,，加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來,。懸浮細胞可省略。
2） 收集細胞懸液,，1000×g離心10min,，棄去培養(yǎng)基，用預冷的PBS潤洗3次。
3） 加入適量的預冷PBS或細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞,。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸,。
4） 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍,，再放室溫解凍樣品,，反復凍融幾次，使細胞充分裂解,。也可將樣品進行超聲破碎,，以達到裂解的目的。
5） 4℃ 10000×g 離心10min,，除去細胞碎片,，取上清，-20℃或-80℃保存,，避免反復凍融,。
5、組織勻漿液
1） 將組織樣本用PBS (0.01 [錨點] [錨點] M, PH 7.4) 沖洗,，洗去組織表面殘留的血液或雜質,。
2） 將組織塊稱重，記錄后剪碎,，碎塊應盡量小,，便于勻漿得更充分
3） 將組織按一定的比例加入預冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中,。（通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿,，例如1g的組織樣本對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,，檢測后計算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數(shù)）
4） 吸取勻漿液到離心管,，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清,，-20℃或-80℃保存,，避免反復凍融。
6,、 尿液,、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min，取上清即可檢測,。
ELISA試劑盒總的來說,，因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應保證所有樣本均為澄清的液體,，沉淀或懸浮物都應離心去除,。
為了保證檢測的準確性,，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測；4℃保存的樣本應在1周內(nèi)進行檢測,。
另外,，還應保證樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性,，從而導致假陰性的結果.