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ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定,，但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求,，在檢測(cè)過程中除正常反應(yīng)外,，有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
1）標(biāo)本因素2）試劑因素3）操作因素,。
下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析,。
1．樣品稀釋 酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋,，不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng),，出現(xiàn)假陽性。因此,，國(guó)外檢測(cè)血清抗體的試劑盒,，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng),，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來,。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗(yàn)確定，以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性,。但是,，有些用戶未能嚴(yán)格按使用說明書操作，如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進(jìn)行稀釋,，個(gè)別用戶取5μl甚至1μl樣品進(jìn)行稀釋,，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確,，檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)問題,。
2．試劑盒平衡 試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫(約25℃)，一般需在室溫放置20～30分鐘以上,。平衡時(shí)間太短會(huì)造成試劑混勻不夠,，樣品孵育時(shí)間相對(duì)縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分,。冬季室溫低,，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。 
3．樣品和試劑的混勻 稀釋前、后的樣品必須充分混勻,，所有試劑在加樣前也須搖勻,，以保證試驗(yàn)的均一性。