小鼠肝星狀細胞永生化公司正在出售的產品：小鼠腎集合管細胞(SV40轉化)M-1（種屬鑒定）人黑瘤細胞WM-266-4(STR鑒定正確)小鼠膠質瘤細胞帶綠色熒光GL261/GFP（種屬鑒定）人膀胱移行細胞癌UM-UC-3(STR鑒定正確)人結直腸腺癌細胞LS174T(STR鑒定正確)人胰腺癌細胞HS 766T(STR鑒定正確)小鼠雜交瘤細胞 SDOW-17 （種屬鑒定）

一,、細胞基本屬性

細胞詳述

肝星狀細胞（HSC)位于Disse間隙內，緊貼著肝竇內皮細胞和肝細胞,。其形態(tài)不規(guī)則,，胞體呈圓形或不規(guī)則形，常伸出數個星狀胞突包繞著肝血竇,。此外,，HSC還伸出胞突與肝細胞、鄰近的星狀細胞相接觸,。HSC是ECM的主要來源,， HSC激活并轉化為肌成纖維細胞樣細胞(MFC)，各種致纖維化因素均把HSC作為最終靶細胞,。肝星狀細胞激活并轉化為肌成纖維細胞樣細胞(MFC),，各種致纖維化因素均把HSC作為最終靶細胞，正常情況下肝星狀細胞處于靜止狀態(tài),。當肝臟受到炎癥或機械刺激等損傷時,，肝星狀細胞被激活，其表型由靜止型轉變?yōu)榧せ钚?。激活的肝星狀細胞一方面通過增生和分泌細胞外基質參與肝纖維化的形成和肝內結構的重建,，另一方面通過細胞收縮使肝竇內壓升高。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶SV40基因,。

注意事項：  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代,，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細胞,。

細胞特性

1) 組織來源于實驗動物的正常肝組織,。

2) 細胞鑒定：結蛋白（Desmin)免疫熒光染色為陽性。

3) 經鑒定細胞純度高于90%,。

4) 不含有 HIV-1,、 HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌,。

5) 細胞生長方式：長梭狀,，星狀細胞，貼壁培養(yǎng)。

二,、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三,、使用方法

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。

四,、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術部溝通,；由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。

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