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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×106 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1242 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 組織來(lái)源 | 大鼠的正常肺動(dòng)脈組織 | 種屬來(lái)源 | 小鼠 |
詳細(xì)介紹
小鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞永生化
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱(chēng) | 小鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞永生化 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 1×106 |
商品貨號(hào) | A01X1242 |
細(xì)胞詳述
肺動(dòng)脈起于右心室,，在主動(dòng)脈之前向左上后方斜行，在主動(dòng)脈弓下方分為左,、右肺動(dòng)脈,，經(jīng)肺門(mén)入肺。由于肺動(dòng)脈連接著輸送靜脈血的右心室,，所以,，肺動(dòng)脈雖然是動(dòng)脈，但是它卻輸送靜脈血,。血管平滑肌細(xì)胞互相連接,，形成管狀結(jié)構(gòu);在功能上可以通產(chǎn)生連續(xù)收縮，使器官對(duì)抗所加負(fù)荷而保持原有的形狀,。該細(xì)胞所表達(dá)的鈣通道表面表達(dá)的ICAM-1和VCAM-1,，參與血管壁炎癥反應(yīng)。體外培養(yǎng)的肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞呈梭形,、星形或不規(guī)則形,。
該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。
注意事項(xiàng)：收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代,，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基,，不能用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。
細(xì)胞特性
1) 組織來(lái)源于大鼠的正常肺動(dòng)脈組織,。
2) 細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）免疫熒光染色為陽(yáng)性,。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%,。
4) 不含有 HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌,。
5) 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭狀細(xì)胞，貼壁培養(yǎng),。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，yi酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。
4. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決,。
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