一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞詳述

滑膜是關(guān)節(jié)囊的內(nèi)層,，淡紅色,，平滑閃光，薄而柔潤(rùn),，由疏松結(jié)締組織組成,。關(guān)節(jié)腔內(nèi)的所有結(jié)構(gòu)，除關(guān)節(jié)軟骨,、半月軟骨板以外,即便是通過關(guān)節(jié)腔的肌腱,、韌帶等均全部為滑膜所包裹。

滑膜分泌滑液,，在關(guān)節(jié)活動(dòng)中起重要作用,。正常滑膜分為兩層,，即薄的細(xì)胞層(內(nèi)腔層)和血管層(內(nèi)膜下層),，是血管豐富的關(guān)節(jié)囊內(nèi)膜，貼附于非關(guān)節(jié)面部分,，覆蓋于關(guān)節(jié)囊內(nèi)的骨面上,，不在軟骨面上，此部分稱為邊緣區(qū)或“裸區(qū)",?；こ史奂t色,，光滑發(fā)亮、濕而潤(rùn)滑,，有時(shí)可見絨毛,，內(nèi)含膠原性纖維。

滑膜細(xì)胞有A,、B兩型,。巨噬細(xì)胞樣A型細(xì)胞，表面有絲狀偽足,、漿膜內(nèi)陷,、囊泡、線粒體,、溶酶體,、胞漿纖維和高爾基體，具有吞噬功能,；B型成纖維

樣滑膜細(xì)胞(FLS) ,，有高濃度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu),，是介導(dǎo) RA 關(guān)節(jié)破壞的主要細(xì)胞,。

 該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

注意事項(xiàng)：  收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代,，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基,，不能用來培養(yǎng)細(xì)胞。

細(xì)胞特性

1）細(xì)胞來源于手術(shù)取得的患風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的關(guān)節(jié)滑膜組織,。

2) 細(xì)胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性,。

3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1,、 HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌。

5) 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：成纖維樣細(xì)胞,，貼壁培養(yǎng),。

二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三,、使用方法

客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。

四,、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請(qǐng)注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。

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