雪貂鼻腔粘膜上皮細胞永生化公司正在出售的產品：人B淋巴細胞瘤細胞RAMOS(STR鑒定正確)正常人腸上皮細胞HIEC-6 (STR鑒定正確)大鼠腹水癌細胞Walker/LLC-WRC 256（種屬鑒定）恒河猴腎細胞MA-4（種屬鑒定）人惡性多發(fā)性畸胎瘤細胞NTERA-2(STR鑒定正確)人甲狀腺癌細胞TT (STR鑒定正確)人乳腺癌細胞MDA-MB-361(STR鑒定正確)

一,、細胞基本屬性

細胞詳述

鼻腔粘膜,，剪成鼻粘膜,，覆蓋于鼻腔表面，粘膜下方為軟骨,、骨或骨骼肌,。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶SV40基因,。

注意事項：  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基,，不能用來培養(yǎng)細胞,。

細胞特性

1) 組織來源于實驗動物的正常鼻腔粘膜組織。

2) 細胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）或細胞角蛋白-19（CK-19）免疫熒光染色為陽性,。經鑒定細胞純度高于90%,。

3) 不含有 HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌,。

4) 細胞生長方式：鋪路石狀細胞，不規(guī)則細胞,，貼壁培養(yǎng),。

二、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三,、使用方法

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內,；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四,、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術部溝通；由于運輸的原因,，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。

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