人單核細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞大鼠小腦顆粒細(xì)胞大鼠心肌成纖維細(xì)胞大鼠心肌細(xì)胞大鼠心臟干細(xì)胞大鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞大鼠心臟纖維原細(xì)胞Gelsolin 人凝溶膠蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒Cyclin-D1 人細(xì)胞周期D1ELISA檢測(cè)試劑盒Cyclin-D2 人細(xì)胞周期D2ELISA檢測(cè)試劑盒Cyclin-D3 人細(xì)胞周期D3ELISA檢測(cè)試劑盒HSP-20 人熱休克蛋白20ELISA檢測(cè)

一,、細(xì)胞基本屬性

 

組織來(lái)源：外周血

種屬來(lái)源：人

細(xì)胞簡(jiǎn)介：?jiǎn)魏思?xì)胞是血液中最大的血細(xì)胞，是機(jī)體防御系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分,。與其他 血細(xì)胞比較,，單核細(xì)胞內(nèi)含有更多的非特異性脂酶，并且具有更強(qiáng)的吞噬作用,。 它通過(guò)吞噬和產(chǎn)生抗體等方式來(lái)抵御和消滅入侵的病原微生物,。D單核細(xì)胞能吞噬 異物產(chǎn)生抗體，  在機(jī)體損傷治愈,、抗御病原的入侵和對(duì)疾病的免疫方面起著重要 的作用,。機(jī)體發(fā)生炎癥或其他疾病都可引起單核細(xì)胞總數(shù)百分比發(fā)生變化，  因此 檢查單核細(xì)胞計(jì)數(shù)成為輔助診斷的一種重要方法,。在機(jī)體的防護(hù),、免疫和創(chuàng)傷愈 治過(guò)程中起協(xié)同作用。盡管它們是血液中的一類細(xì)胞成分,，但它們功能的發(fā)揮,， 更多地體現(xiàn)在循環(huán)管道外的器官組織中。在功能方面它們與這些器官組織中的許 多細(xì)胞成分如巨噬細(xì)胞,、肥大細(xì)胞,、成纖維細(xì)胞等密切相關(guān)。

培養(yǎng)基：原代巨噬細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：半懸浮培養(yǎng)

細(xì)胞形態(tài)：?jiǎn)魏思?xì)胞

傳代特性：細(xì)胞特性確定傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：  空氣，95%,；CO2 ,，5%

二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三,、使用方法

人單核細(xì)胞是一種半懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈單核細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被,。

四、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,，消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問(wèn)題得到解決,。

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