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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X2022 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 組織來(lái)源 | 主動(dòng)脈組織 | 種屬來(lái)源 | 兔 |
詳細(xì)介紹
兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
一,、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | 兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X2022 |
組織來(lái)源 | 主動(dòng)脈組織 | 種屬來(lái)源 | 兔 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
包被條件：PLL(0.1mg/ml),，明膠(0.1%)
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
傳代比例：1:2
細(xì)胞簡(jiǎn)介：兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自主動(dòng)脈組織；主動(dòng)脈是體循環(huán)的動(dòng)脈主干,。其運(yùn)行路徑為：升主動(dòng)脈起于左心室,，至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動(dòng)脈弓，弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動(dòng)脈,；在第12胸椎體高度穿膈的主動(dòng)脈裂孔移行為腹主動(dòng)脈,，以上為胸主動(dòng)脈，至第4腰椎體下緣分為左,、右髂總動(dòng)脈,；髂總動(dòng)脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi)、外動(dòng)脈,。主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是覆蓋在主動(dòng)脈內(nèi)面的單層細(xì)胞,，可分泌一系列血管活性物質(zhì)而保持血管穩(wěn)態(tài)，當(dāng)其受到炎癥或其它因素刺激后穩(wěn)態(tài)被破壞而導(dǎo)致一些心血管疾病的發(fā)生,。因此,，主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞已成為研究心血管疾病發(fā)病機(jī)制及治療藥物的工具。內(nèi)皮細(xì)胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專門上皮細(xì)胞,，由一層扁平細(xì)胞所組成,。它形成血管的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁(單層鱗狀上皮)的接口,。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個(gè)循環(huán)系統(tǒng),，由心臟直至小的微血管,。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g,，20min,，4℃離心,，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問(wèn)題得到解決,。
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