大鼠心肌干細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：兔氣管上皮細(xì)胞小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞小鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞小鼠腎成纖維細(xì)胞小鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞小鼠腎動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞小鼠腎皮質(zhì)上皮細(xì)胞小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞小鼠腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞小鼠腎小管上皮細(xì)胞小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞小鼠腎小球上皮細(xì)胞小鼠腎小球系膜細(xì)胞小鼠腎足突細(xì)胞小鼠食管平滑肌細(xì)胞

大鼠心肌干細(xì)胞

一,、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：原代心肌干細(xì)胞培養(yǎng)體系

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ,，95%；  CO2 ,，  5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介：心臟作為終末分化器官 ,，然而近年來(lái)研究證實(shí)了心臟包含了可以再生的細(xì)胞 ，即 心肌干細(xì)胞,。干細(xì)胞移植作為一種治療心臟疾病的新方法收到了廣泛的關(guān)注,。此

外 ，來(lái)源于同一器官的干細(xì)胞可避免異體干細(xì)胞移植導(dǎo)致的免疫排斥等風(fēng)險(xiǎn)。

心肌干細(xì)胞主要分化為心肌細(xì)胞 ,，也可分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞與平滑肌細(xì)胞,。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問(wèn)題得到解決,。
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