大鼠腦動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：大鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞人髓母細(xì)胞瘤組織源細(xì)胞大鼠肺泡巨噬細(xì)胞人食管癌組織源成纖維細(xì)胞小鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞大鼠腹膜間皮細(xì)胞人外周血單個(gè)核細(xì)胞小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞大鼠腹腔巨噬細(xì)胞人胚肺成纖維細(xì)胞小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞大鼠肝外膽管上皮細(xì)胞小鼠精原干細(xì)胞大鼠睪丸支持細(xì)胞大鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞

大鼠腦動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

一,、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)體系

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ,，95%,；  CO2 ，  5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介：血管疾病發(fā)生和發(fā)展的一個(gè)主要因素是由于血管平滑肌細(xì)胞  (smooth muscle    cells, SMCs)  轉(zhuǎn)變成為了具有繁殖能力的表型,。近期的研究表明平滑肌細(xì)胞能表 達(dá)鈣離子通道 ,，  ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)可能是造成 血管壁炎癥反應(yīng) ,，并進(jìn)一步造成血管疾病的原因,。  因此 ，對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的體 外培養(yǎng)和研究可用來發(fā)現(xiàn)和確定新的血管疾病的靶向治療方法,。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。
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