大鼠骨骼肌成纖維細胞公司正在出售的產(chǎn)品：人腹膜微血管內皮細胞人類皮膚纖維母細胞人肺微血管內皮細胞人臍帶動脈內皮細胞人小腸上皮細胞人腸平滑肌細胞人臍靜脈血管內皮細胞鈣調磷(CaN)ELISA試劑盒鈣調結合蛋白(CALD)ELISA試劑盒鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒鈣聯(lián)蛋白(calnexin)ELISA試劑盒鈣離子通道抗體(IgG)ELISA試劑盒鈣結合蛋白S100A14ELISA試劑盒鈣結合

一,、細胞基本屬性

 

組織來源：骨骼肌組織

種屬來源：大鼠

細胞簡介：大鼠骨骼肌細胞分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱橫紋肌,，肌肉中的一種,，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長柱形的多核細胞,，肌膜的外面有基膜緊密貼附,。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內臟橫紋肌,，其中骨骼肌主要分布于四肢,。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結構和功能的器官,，有豐富的血管,、淋巴分布，在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張,，進行隨意運動,。肌肉可根據(jù)共形狀、大小,、位置,、起止點,、纖維方向和作用等命名,。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌,、三角肌,、梨狀肌等。骨骼肌細胞呈纖維狀,，不分支,，有明顯橫紋，核很多,，且都位于細胞膜下方。肌細胞內有許多沿細胞長軸平行排列的細絲狀肌原纖維,。每一肌原纖維都有相間排列的明帶(Ⅰ帶)及暗帶(A帶),。明帶染色較淺，而暗帶染色較深,。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線,。H線的中部有一M線。明帶中間,，有一條較暗的線稱為Z線,。兩個Z線之間的區(qū)段，叫做一個肌節(jié),。骨骼肌細胞也稱橫紋肌細胞，細胞呈纖維狀,，不分支,，有明顯橫紋，核很多,，且都位于細胞膜下方,，細胞多呈梭行,，具有一定的方向性,。

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

傳代比例：1:2

二,、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三,、使用方法

大鼠骨骼肌成纖維細胞是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈成纖維細胞樣，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。

四,、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術部溝通,；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。

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