大鼠海綿體內(nèi)皮細胞公司正在出售的產(chǎn)品：猴腎細胞小鼠胰腺癌細胞豬鼻甲黏膜成纖維細胞豬腎細胞系大鼠正常肝細胞人惡性黑色瘤細胞人神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤細胞凋亡蛋白活化因子1(APAF-1)ELISA試劑盒淀粉狀蛋白β(A4)前體蛋白結(jié)合家族B成員1(FE65)ELISA試劑盒電子轉(zhuǎn)運黃蛋白-泛醌氧化還原/電子轉(zhuǎn)運黃蛋白脫氫(ETFDH)ELISA試劑盒電壓門控鉀通道抗體(VGKC-ab)ELISA試劑盒電壓門控

一,、細胞基本屬性

 

組織來源：海綿體組織

種屬來源：大鼠

細胞簡介：大鼠海綿體內(nèi)皮細胞分離自海綿體組織,；陰莖海綿體是由海綿狀的小梁和腔隙構(gòu)成的血竇結(jié)構(gòu)，它主要包括海綿體內(nèi)皮細胞,、平滑肌細胞和成纖維細胞3種細胞成分,。其中平滑肌細胞和成纖維細胞鑲嵌于海綿體細胞外基質(zhì)的膠原中，而海綿體內(nèi)皮細胞則覆蓋于海綿體血竇的腔面,，僅占海綿體組織的2.8%,。在消化海綿體組織時，膠原酶的作用主要是松解海綿體內(nèi)皮細胞與基膜的聯(lián)系,，破壞海綿體內(nèi)皮細胞間的緊密連接,。如果消化時間延長或膠原酶濃度過大,，平滑肌細胞和成纖維細胞也將被消化下來,，從而影響海綿體內(nèi)皮細胞的純度。因此,，比較篩選合適的膠原酶濃度和消化時間是成功分離海綿體內(nèi)皮細胞的關(guān)鍵,。

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

包被條件：PLL(0.1mg/ml),，明膠(0.1%)

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

傳代比例：1:2

二、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三,、使用方法

大鼠海綿體內(nèi)皮細胞是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈內(nèi)皮細胞樣，在技術(shù)部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。

四,、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。

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