大鼠角膜上皮細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：大鼠肺成纖維細(xì)胞大鼠腎成纖維細(xì)胞人腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞小鼠尿道上皮細(xì)胞大鼠尿道上皮細(xì)胞人腎動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞小鼠輸尿管上皮細(xì)胞大鼠輸尿管上皮細(xì)胞人腎成纖維細(xì)胞人膀胱成纖維細(xì)胞小鼠心肌細(xì)胞大鼠心肌細(xì)胞人尿道上皮細(xì)胞小鼠心肌成纖維細(xì)胞大鼠心肌成纖維細(xì)胞

大鼠角膜上皮細(xì)胞

培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

包被條件：鼠尾膠原I（2-5μg/cm2）

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介：大鼠角膜上皮細(xì)胞分離自眼角膜組織,；角膜位于眼球前壁的一層透明膜,，約占纖維膜 的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形,。角膜厚度各部分不盡相同,，中央部薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢,，如有外物接觸角膜,，眼瞼便會(huì)不由自主地合上以 保護(hù)眼睛。為了保持透明,，角膜并沒有血管,，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣 ,。角膜分為五層,，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層,、基質(zhì)層,、后彈力層、內(nèi)皮細(xì) 胞層,。其主要功能如下：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白 的功能,，分三層細(xì)胞層,，外層即是上皮細(xì)胞,；②角膜上皮細(xì)胞能參與先天性免疫,，能感應(yīng) 病原體存在并發(fā)出信號(hào)從而激活角膜防御系統(tǒng)；③角膜上皮細(xì)胞能高效表達(dá)醛脫氫酶,。角 膜上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)對(duì)研究角膜的生理學(xué),、病理學(xué)、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)都是極為重 要的手段,，常用于研究細(xì)胞代謝產(chǎn)物,、病毒感染、各種生長(zhǎng)因子和藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 ,。
一,、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。