大鼠脾源性內(nèi)皮祖細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：雞外周血單核細(xì)胞大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞小鼠胚胎肝母細(xì)胞大鼠胚胎肝母細(xì)胞人淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞人胸腺上皮細(xì)胞小鼠胰腺腺泡細(xì)胞大鼠羊膜間質(zhì)細(xì)胞人鼻黏膜成纖維細(xì)胞小鼠羊膜上皮細(xì)胞大鼠羊膜上皮細(xì)胞人卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞小鼠棕色前脂肪細(xì)胞大鼠棕色前脂肪細(xì)胞人骨骼肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞

大鼠脾源性內(nèi)皮祖細(xì)胞

培養(yǎng)基：原代內(nèi)皮祖細(xì)胞培養(yǎng)體系

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ，95%,；  CO2 ，  5%

細(xì)胞簡介：脾是重要的淋巴器官 ,，有造血,、濾血、清除衰老血細(xì)胞及參與免疫反應(yīng)等功能,。 也是淋巴細(xì)胞遷移和接受抗原刺激后發(fā)生免疫應(yīng)到,、產(chǎn)生免疫效應(yīng)分子的重要場 所。  內(nèi)皮祖細(xì)胞具有游走特性 ,，能進一步增殖分化的幼稚內(nèi)皮細(xì)胞 ,，缺乏成熟內(nèi) 皮細(xì)胞的特征性表型 ，不能形成管腔樣結(jié)構(gòu),。其功能主要為參與了出生后缺血組 織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復(fù),。
一、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進行細(xì)胞鑒定,。

實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。