大鼠乳腺上皮細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：兔骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞大鼠骨髓單核細(xì)胞大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞大鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞大鼠骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞大鼠骨外膜細(xì)胞大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞大鼠冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞大鼠冠狀動脈平滑肌細(xì)胞大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞大鼠海綿體內(nèi)皮細(xì)胞大鼠海綿體平滑肌細(xì)胞大鼠頜骨成纖維細(xì)胞大鼠頜下腺上皮細(xì)胞

大鼠乳腺上皮細(xì)胞

一,、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2,，5%

細(xì)胞簡介：大鼠乳腺上皮細(xì)胞分離自乳腺組織；乳腺是復(fù)管泡狀皮膚腺,，主要由腺上皮細(xì)胞組成,，并具有特殊的泌乳功能。在妊娠期,，導(dǎo)管末梢發(fā)育成腺泡,；近年來的許多研究都表明乳腺癌、乳腺炎等的發(fā)生都與乳腺上皮細(xì)胞(MEC)有密切聯(lián)系,，體外分離培養(yǎng)MECs即成為研究開展的關(guān)鍵步驟,。乳腺是乳房的腺體組織，乳腺由導(dǎo)管和腺泡組成,，腺泡是分泌乳汁的重要部分,。乳腺的正常發(fā)育是由體內(nèi)激素和局部合成的生長因子共同調(diào)控，其中乳腺表達(dá)的生長因子對乳腺上皮細(xì)胞的增殖,、分化,、凋亡產(chǎn)生極大的影響。乳腺上皮細(xì)胞分離自分娩后3-5天的乳腺組織,，為貼壁生長型細(xì)胞,，呈多角形、圓形以及短梭形,；乳腺上皮細(xì)胞主要功能即生乳功能,。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。
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