大鼠氣管上皮細胞公司正在出售的產(chǎn)品：野生型人c-kit受體細胞株新生牛眼Tenon's囊成纖維細胞人APP-PS1(C4Y)雙基因轉染細胞株人APP基因轉染CHO細胞株C3H/An小鼠結締組織細胞（L929-TK-）鼬肺上皮細胞SV40轉化的非洲綠猴腎細胞（干細胞庫保藏）Apelin 36(AP36)ELISA試劑盒apelin 13(AP13)ELISA試劑盒apelin 12(AP12)ELI

一、細胞基本屬性

 

組織來源：氣管

種屬來源：大鼠

細胞簡介：大鼠氣管上皮細胞分離自氣管組織,；氣管(Trachea),，呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀,。上端平第六頸椎下緣,，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四,、五胸椎體(相當胸骨角平面)交界處,，分左、右主支氣管,，分叉處稱為氣管杈,。氣管主要由14-16個半環(huán)狀軟骨構成，有彈性,，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán),，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來,，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結締組織連接,，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜,，表面覆蓋纖毛上皮,，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出,，以凈化吸入的氣體,。氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線，不僅是各種病原體,、炎癥介質作用的靶細胞,，還作為效應細胞合成、釋放多種炎性介質和細胞因子從而參與氣道炎癥及免疫反應,。體外培養(yǎng)的原代氣管上皮細胞因與體內組織在形態(tài)結構和功能活動上存在很大的相似性,，因此，在基礎及臨床研究中極為重要,。

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

二,、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三、使用方法

大鼠氣管上皮細胞是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈上皮細胞樣,，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內,；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四,、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術部溝通,；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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