大鼠腎小球系膜細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：小鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞大鼠子宮平滑肌細(xì)胞雞肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞雞肺動脈平滑肌細(xì)胞雞卵泡基膜細(xì)胞雞卵泡顆粒細(xì)胞雞胚成纖維細(xì)胞雞前脂肪細(xì)胞雞外周血淋巴細(xì)胞人表皮成纖維細(xì)胞人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞人腸動脈內(nèi)皮細(xì)胞人腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞人成骨細(xì)胞

大鼠腎小球系膜細(xì)胞

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細(xì)胞簡介：大鼠腎小球系膜細(xì)胞分離自腎小球組織；腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢,，被鮑氏囊所包裹,，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動脈進(jìn)入腎小球,。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管,，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈,。在腎小球內(nèi),，微血管受到高壓，而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進(jìn)行,。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后,，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi),。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體,，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球系膜是位于腎小球毛細(xì)血管袢之間的一種特殊間充質(zhì)，由系膜細(xì)胞和系膜基質(zhì)組成,。腎小球系膜細(xì)胞是腎小球內(nèi)非?；钴S的細(xì)胞，具有分泌細(xì)胞基質(zhì),、產(chǎn)生細(xì)胞因子,、吞噬和清除大分子物質(zhì)及類似平滑肌細(xì)胞收縮的功能。腎小球系膜細(xì)胞增生和基質(zhì)的過多產(chǎn)生是多種腎小球腎炎的主要病理表現(xiàn),。腎小球系膜細(xì)胞的培養(yǎng)是研究系膜擴(kuò)張,、瘢痕形成和腎小球硬化的理想方法。系膜細(xì)胞的主要作用可能有：①收縮作用,，入球小動脈和出球動脈的收縮作用受系膜細(xì)胞的調(diào)節(jié),，以影響毛細(xì)血管袢的內(nèi)壓和濾過率；②支持作用,，它填充于毛細(xì)血管袢之間,，支持毛細(xì)血管的位置；③吞噬作用,，能吞噬被阻留在基膜內(nèi)的大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì),；④分泌腎素，在腎缺血或免疫復(fù)合物沉積時,，系膜細(xì)胞增生且分泌腎素,。
一、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實驗步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。