大鼠腎小球系膜細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：小鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞大鼠子宮平滑肌細(xì)胞雞肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞雞肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞雞卵泡基膜細(xì)胞雞卵泡顆粒細(xì)胞雞胚成纖維細(xì)胞雞前脂肪細(xì)胞雞外周血淋巴細(xì)胞人表皮成纖維細(xì)胞人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞人腸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞人腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞人成骨細(xì)胞

大鼠腎小球系膜細(xì)胞

培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介：大鼠腎小球系膜細(xì)胞分離自腎小球組織,；腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢，被鮑氏囊所包裹,，是尿液形成的重要構(gòu)造,。血液經(jīng)由入球小動(dòng)脈進(jìn)入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管,，匯流入靜脈,，而是流入出球小動(dòng)脈。在腎小球內(nèi),，微血管受到高壓,，而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進(jìn)行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后,，形成濾液,，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體,，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率,。腎小球系膜是位于腎小球毛細(xì)血管袢之間的一種特殊間充質(zhì)，由系膜細(xì)胞和系膜基質(zhì)組成,。腎小球系膜細(xì)胞是腎小球內(nèi)非?；钴S的細(xì)胞，具有分泌細(xì)胞基質(zhì),、產(chǎn)生細(xì)胞因子,、吞噬和清除大分子物質(zhì)及類似平滑肌細(xì)胞收縮的功能,。腎小球系膜細(xì)胞增生和基質(zhì)的過多產(chǎn)生是多種腎小球腎炎的主要病理表現(xiàn)。腎小球系膜細(xì)胞的培養(yǎng)是研究系膜擴(kuò)張,、瘢痕形成和腎小球硬化的理想方法,。系膜細(xì)胞的主要作用可能有：①收縮作用，入球小動(dòng)脈和出球動(dòng)脈的收縮作用受系膜細(xì)胞的調(diào)節(jié),，以影響毛細(xì)血管袢的內(nèi)壓和濾過率,；②支持作用，它填充于毛細(xì)血管袢之間,，支持毛細(xì)血管的位置,；③吞噬作用，能吞噬被阻留在基膜內(nèi)的大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì),；④分泌腎素,，在腎缺血或免疫復(fù)合物沉積時(shí)，系膜細(xì)胞增生且分泌腎素,。
一,、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請(qǐng)注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。