大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：小鼠胚胎干細(xì)胞Nanog-GFP（干細(xì)胞庫保藏）小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）OSKM-1（干細(xì)胞庫保藏）Wistar大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏）人誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）DYP0530（干細(xì)胞庫保藏）小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）OSKZ-1（干細(xì)胞庫保藏）人誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）DYR00（干細(xì)胞庫保藏）大鼠骨髓MSC間充質(zhì)干

一、細(xì)胞基本屬性

 

組織來源：三叉神經(jīng)組織

種屬來源：大鼠

細(xì)胞簡介：大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞分離自三叉神經(jīng)組織,；三叉神經(jīng)為粗大的混合性腦神經(jīng),，含一般軀體感覺和特殊內(nèi)臟運動兩種纖維。其特殊內(nèi)臟運動纖維起于腦橋中段的三叉神經(jīng)運動核,，纖維組成三叉神經(jīng)運動根,，由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦，位于感覺根下內(nèi)側(cè),，后進入三叉神經(jīng)第3支下頜神經(jīng)中,，經(jīng)卵圓孔出顱，隨下頜神經(jīng)分支分布于咀嚼肌等,。運動根內(nèi)還含有三叉神經(jīng)中腦核有關(guān)的纖維,，主要傳導(dǎo)咀嚼肌的本體感覺,。三叉神經(jīng)內(nèi)以軀體感覺神經(jīng)纖維為主，這些纖維的細(xì)胞體位于三叉神經(jīng)節(jié)(半月節(jié))內(nèi),，該神經(jīng)節(jié)位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉神經(jīng)壓跡處,，為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。三叉神經(jīng)節(jié)由假單極神經(jīng)元組成,，其中樞突集中構(gòu)成了粗大的三叉神經(jīng)感覺根,，由腦橋基底部與腦橋臂交界處入腦，止于三叉神經(jīng)諸感覺核,，其中傳導(dǎo)痛溫覺的纖維主要終止于三叉神經(jīng)脊束核,；傳導(dǎo)觸覺的纖維主要終止于三叉神經(jīng)腦橋核。三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的周圍突組成三叉神經(jīng)三大分支,，即第1支眼神經(jīng)、第2支上頜神經(jīng),、第3支為下頜神經(jīng),。從3大分支不斷分支分布于面部皮膚、眼及眶內(nèi),、口腔,、鼻腔、鼻旁竇的粘膜,、牙,、腦膜等，傳導(dǎo)痛,、溫,、觸等多種感覺。

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.125%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

二,、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三,、使用方法

大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈神經(jīng)元細(xì)胞樣,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進行相關(guān)實驗,。

客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。

4. 細(xì)胞實驗

因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。

四,、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。

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