大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：大鼠頜下腺上皮細(xì)胞人破骨細(xì)胞人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞人臍帶血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞人臍靜脈平滑肌細(xì)胞人氣管平滑肌細(xì)胞人氣管上皮細(xì)胞人髂動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞人前列腺癌組織源細(xì)胞人前列腺成纖維細(xì)胞人前列腺基質(zhì)細(xì)胞人前列腺平滑肌細(xì)胞

大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞

一,、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement、Penicillin,、Streptomycin等

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

傳代比例：不傳代

細(xì)胞簡(jiǎn)介：大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織,；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜,。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成,，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離,。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連,，由色素上皮細(xì)胞組成，它們具有支持和營(yíng)養(yǎng)光感受器細(xì)胞,、遮光,、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層,，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層,、視錐、視桿細(xì)胞層,、外界膜,、外顆粒層、外叢狀層,、內(nèi)顆粒層,、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層,、神經(jīng)纖維層,、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜,，有感光作用,；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個(gè)神經(jīng)元組成,。第一神經(jīng)元是視細(xì)胞層,，專司感光，它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞,。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上,，而視錐細(xì)胞則在中心凹處多。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞,，約有10到數(shù)百個(gè)視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個(gè)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系,，負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層，專管傳導(dǎo),。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu),，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動(dòng)的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面,，經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口,。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區(qū),，其分辨能力,。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞貼壁后呈單層排列，部分細(xì)胞聚集成團(tuán),，細(xì)胞呈圓形或橢圓形,，核圓且相對(duì)透明，有些細(xì)胞膜上伸出短而小的突起,；該細(xì)胞為高度分化細(xì)胞,，在體外屬于不增殖群。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞是青光眼病理性損害的主要細(xì)胞,，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的死亡可導(dǎo)致視功能不可逆損傷,，研究視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損害的細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)機(jī)制有利于青光眼發(fā)病機(jī)制的研究。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。
公司正在出售的產(chǎn)品：